24小时热门版块排行榜    

查看: 2017  |  回复: 16
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

蝶谷医仙

新虫 (小有名气)

[交流] 求助:怎样用培养的细胞做PCR

培养了一大堆血管内皮细胞,老板说该用来做PCR了,说完就走了,老板是美国人,在下刚进实验室没几天,完全找不到北。
补充一下,我的课题大概思路是这样的,血管内皮细胞的某一段DNA序列(目前我对这段基因完全不了解)产生一种标记性蛋白,现在要检测加入某种生长因子后对产生这种蛋白有何影响。所以先培养了些血管内皮细胞,下一步我该怎么进行呢?为什么要我做PCR?其目的何在?我现在有一大堆细胞,该怎么来进行PCR?第一步是什么?恳请高手们指点,多谢啊!

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-6 at 08:33 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

paulajjh

木虫 (著名写手)

建议你跟老板多交流,目的性的做实验
3楼2009-08-25 08:37:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

seabird06

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:53
1.提取全基因组DNA并保存,有Kit。
2.看有没有引物,做PCR是检测目的基因RNA水平在加入生长因子后有没有改变。

你实验室除了你老板不会只有你一个人了吧?
2楼2009-08-25 06:49:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

holyala

木虫 (著名写手)

砖家

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-25 14:17
引用回帖:
Originally posted by seabird06 at 2009-8-25 06:49:
1.提取全基因组DNA并保存,有Kit。
2.看有没有引物,做PCR是检测目的基因RNA水平在加入生长因子后有没有改变。

你实验室除了你老板不会只有你一个人了吧?

有点不明白,用gDNA做模版进行PCR,怎么检测RNA水平的变化?
照楼主说的实验目的,还不如提总mRNA,然后做RT-PCR......那比用细胞做原位PCR麻烦多了。
4楼2009-08-25 09:10:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

357601798


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
第一步是提取DNA,然后从NCBI找血管内皮细胞的基因序列,根据序列设计引物。多看相关文献就会了。
5楼2009-08-25 09:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +3 Ldrop2023 2026-08-13 3/150 2026-08-14 14:07 by gltch
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +19 医学老男孩 2026-08-13 43/2150 2026-08-14 13:34 by 医学老男孩
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +5 启萌科技 2026-08-12 13/650 2026-08-14 10:53 by lnjx2024
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见