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蝶谷医仙

新虫 (小有名气)

[交流] 求助:怎样用培养的细胞做PCR

培养了一大堆血管内皮细胞,老板说该用来做PCR了,说完就走了,老板是美国人,在下刚进实验室没几天,完全找不到北。
补充一下,我的课题大概思路是这样的,血管内皮细胞的某一段DNA序列(目前我对这段基因完全不了解)产生一种标记性蛋白,现在要检测加入某种生长因子后对产生这种蛋白有何影响。所以先培养了些血管内皮细胞,下一步我该怎么进行呢?为什么要我做PCR?其目的何在?我现在有一大堆细胞,该怎么来进行PCR?第一步是什么?恳请高手们指点,多谢啊!

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-6 at 08:33 ]
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357601798


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
第一步是提取DNA,然后从NCBI找血管内皮细胞的基因序列,根据序列设计引物。多看相关文献就会了。
5楼2009-08-25 09:51:43
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查看全部 17 个回答

seabird06

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:53
1.提取全基因组DNA并保存,有Kit。
2.看有没有引物,做PCR是检测目的基因RNA水平在加入生长因子后有没有改变。

你实验室除了你老板不会只有你一个人了吧?
2楼2009-08-25 06:49:47
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paulajjh

木虫 (著名写手)

建议你跟老板多交流,目的性的做实验
3楼2009-08-25 08:37:15
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-25 14:17
引用回帖:
Originally posted by seabird06 at 2009-8-25 06:49:
1.提取全基因组DNA并保存,有Kit。
2.看有没有引物,做PCR是检测目的基因RNA水平在加入生长因子后有没有改变。

你实验室除了你老板不会只有你一个人了吧?

有点不明白,用gDNA做模版进行PCR,怎么检测RNA水平的变化?
照楼主说的实验目的,还不如提总mRNA,然后做RT-PCR......那比用细胞做原位PCR麻烦多了。
4楼2009-08-25 09:10:55
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