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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » FM4-64染料，染色蓝藻后，在荧光显微镜下无法屏蔽自发的细胞内荧光，如何解决？
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Chsir

新虫 (正式写手)

[求助] FM4-64染料，染色蓝藻后，在荧光显微镜下无法屏蔽自发的细胞内荧光，如何解决？ 已有1人参与

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1楼 2021-11-15 19:24:46
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用户晓晓

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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Chsir: 金币+20, ★★★很有帮助 2021-11-20 12:08:30
如果自带荧光那么选择染料时候就应该避开自带荧光波段。无论共聚焦还是普通荧光显微镜都是无法区分光是由谁发出来的。

还有就是有一种可能就是虽然是发同种颜色荧光，但自发荧光峰值波长和染料荧光波长有一定的差异（即有非重叠波段），这时候共聚焦就显得“高级”了，因为共聚焦一般同种颜色荧光也配置有不同的波长通道可以选择，这时候选择非重叠波段检测，就能避开自发荧光。
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Chsir
2楼2021-11-19 21:54:21
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Chsir

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 用户晓晓 at 2021-11-19 21:54:21
如果自带荧光那么选择染料时候就应该避开自带荧光波段。无论共聚焦还是普通荧光显微镜都是无法区分光是由谁发出来的。

还有就是有一种可能就是虽然是发同种颜色荧光，但自发荧光峰值波长和染料荧光波长有一定的差 ...

谢谢回复，随着染色次数增多，染色效果好了一些，准备再上一次激光共聚焦看一下（首次上共聚焦看效果也不好，不知道是染色染的不好还是共聚焦本身无法区分开藻自带荧光与染料荧光）。染料的激发波长514，自带荧光是488，还蛮近的。
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3楼2021-11-20 12:13:18
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