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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教大肠杆菌细胞破碎方法
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vivihao

金虫 (小有名气)
★
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Originally posted by l_inhumain at 2009-8-24 22:57:
只为了跑SDS-PAGE点用的话取点菌体洗一下，悬浮后，加入LOADING BUFFER 煮十分钟，离心跑电泳就可以了，不要破包

胞内蛋白依然能跑出来  不用担心~
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21楼2009-08-25 10:49:25
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kxjh

金虫 (小有名气)
直接冰浴超声破碎
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22楼2009-08-25 10:55:31
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by vivihao at 2009-8-25 10:49:



胞内蛋白依然能跑出来  不用担心~

谢谢！
如果我要做纯化的话 又该怎么做呢
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23楼2009-08-25 12:07:14
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by kxjh at 2009-8-25 10:55:
直接冰浴超声破碎

超声波的参数是怎样的呢 怎么操作的 谢谢
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24楼2009-08-25 12:07:59
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
★
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Originally posted by stefa at 2009-8-25 09:19:

那如果是胞内的蛋白质 不是检测不出来了？

能检测出来的   我都是这么做的
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25楼2009-08-25 21:43:42
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biodadiao

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
若是直接用于做SDS-PAGE的话，可以取1ml离心，弃上清，加50ul的PBS溶液，然后再加50ul 2xSDS-PAGE上样缓冲溶液，上样前99度加热5min后，离心取上清即可
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26楼2009-08-25 22:06:20
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biodadiao

铜虫 (小有名气)
若是纯化的话，小量可以超声破碎仪（记得一定要冰浴），400kHZ的情况下，20min一般足以，大量的话可以用高压匀浆仪了
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27楼2009-08-25 22:08:19
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
我们实验室发酵大肠杆菌，所以蛋白是胞内，破碎的时候直接高压匀浆，再分离纯化，效果非常好。楼主不妨也可以试试啊~
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
28楼2009-08-25 23:44:26
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bettyshan at 2009-8-25 23:44:
我们实验室发酵大肠杆菌，所以蛋白是胞内，破碎的时候直接高压匀浆，再分离纯化，效果非常好。楼主不妨也可以试试啊~

哎  没有这个设备啊
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29楼2009-08-26 10:27:25
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wangwbio

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
说明没有破碎细胞，也没有提取到蛋白
请问有没有人用这个方法做过啊
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30楼2009-08-26 10:41:41
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