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stefa

新虫 (小有名气)

[交流] 请教大肠杆菌细胞破碎方法

RT
需要详细的步骤,最好是用溶菌酶处理的方法,谢谢了!

[ Last edited by stefa on 2009-8-24 at 20:31 ]
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l_inhumain

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
只为了跑SDS-PAGE点用的话取点菌体洗一下,悬浮后,加入LOADING BUFFER 煮十分钟,离心跑电泳就可以了,不要破包
19楼2009-08-24 22:57:40
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vivihao

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by l_inhumain at 2009-8-24 22:57:
只为了跑SDS-PAGE点用的话取点菌体洗一下,悬浮后,加入LOADING BUFFER 煮十分钟,离心跑电泳就可以了,不要破包

胞内蛋白依然能跑出来  不用担心~
21楼2009-08-25 10:49:25
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biodadiao

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
若是直接用于做SDS-PAGE的话,可以取1ml离心,弃上清,加50ul的PBS溶液,然后再加50ul 2xSDS-PAGE上样缓冲溶液,上样前99度加热5min后,离心取上清即可
26楼2009-08-25 22:06:20
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stefa

新虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-24 21:09
我按照分子克隆指南里第15章方案5的做法用溶菌酶处理抽提细胞
但是跑sds-page的时候,却没有条带
说明没有破碎细胞,也没有提取到蛋白
请问有没有人用这个方法做过啊
2楼2009-08-24 15:30:09
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
干嘛非用溶菌酶? 直接冰浴超声不行吗?
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-08-24 16:29:04
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

若是为了走SDS-PAGE, 我都直接拿细胞做的,根本不用破的。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-08-24 16:30:12
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stefa

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-8-24 16:30:
若是为了走SDS-PAGE, 我都直接拿细胞做的,根本不用破的。

不破碎的话  那胞内的蛋白质能跑出来嘛
5楼2009-08-24 16:45:30
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stefa

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-8-24 16:29:
干嘛非用溶菌酶? 直接冰浴超声不行吗?

实验室里只有一台清洗用的超声波
6楼2009-08-24 16:46:13
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)

直接超声就可以了。
7楼2009-08-24 16:53:16
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stefa

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by cauzhangtao at 2009-8-24 16:53:
直接超声就可以了。

可否告知详细的方法和步骤呢  谢谢
8楼2009-08-24 17:32:28
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tiani_tan

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
小量的时候我们用过溶菌酶的破壁方法,但溶液太稠,容易吸空,所以吸得时候要看一下,或是上样前多煮一下,就行了
9楼2009-08-24 18:55:01
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stefa

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by stefa at 2009-8-24 17:32:


可否告知详细的方法和步骤呢  谢谢

用溶菌酶怎么处理啊
是不是先在冰上放置30min后,再在-60度反复冻融几次破碎细胞膜
然后加Triton Dnase Rnase等试剂呢?
10楼2009-08-24 19:21:37
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