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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教大肠杆菌细胞破碎方法
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stefa

新虫 (小有名气)

[交流] 请教大肠杆菌细胞破碎方法

RT
需要详细的步骤，最好是用溶菌酶处理的方法,谢谢了！

[ Last edited by stefa on 2009-8-24 at 20:31 ]
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1楼 2009-08-24 13:57:43
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l_inhumain

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
只为了跑SDS-PAGE点用的话取点菌体洗一下，悬浮后，加入LOADING BUFFER 煮十分钟，离心跑电泳就可以了，不要破包
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19楼2009-08-24 22:57:40
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vivihao

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by l_inhumain at 2009-8-24 22:57:
只为了跑SDS-PAGE点用的话取点菌体洗一下，悬浮后，加入LOADING BUFFER 煮十分钟，离心跑电泳就可以了，不要破包

胞内蛋白依然能跑出来  不用担心~
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21楼2009-08-25 10:49:25
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biodadiao

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
若是直接用于做SDS-PAGE的话，可以取1ml离心，弃上清，加50ul的PBS溶液，然后再加50ul 2xSDS-PAGE上样缓冲溶液，上样前99度加热5min后，离心取上清即可
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26楼2009-08-25 22:06:20
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stefa

新虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-24 21:09
我按照分子克隆指南里第15章方案5的做法用溶菌酶处理抽提细胞
但是跑sds-page的时候，却没有条带
说明没有破碎细胞，也没有提取到蛋白
请问有没有人用这个方法做过啊
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2楼2009-08-24 15:30:09
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
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干嘛非用溶菌酶？ 直接冰浴超声不行吗？
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-08-24 16:29:04
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
若是为了走SDS-PAGE， 我都直接拿细胞做的，根本不用破的。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-08-24 16:30:12
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-8-24 16:30:
若是为了走SDS-PAGE， 我都直接拿细胞做的，根本不用破的。

不破碎的话  那胞内的蛋白质能跑出来嘛
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5楼2009-08-24 16:45:30
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-8-24 16:29:
干嘛非用溶菌酶？ 直接冰浴超声不行吗？

实验室里只有一台清洗用的超声波
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6楼2009-08-24 16:46:13
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
直接超声就可以了。
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7楼2009-08-24 16:53:16
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cauzhangtao at 2009-8-24 16:53:
直接超声就可以了。

可否告知详细的方法和步骤呢  谢谢
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8楼2009-08-24 17:32:28
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小量的时候我们用过溶菌酶的破壁方法，但溶液太稠，容易吸空，所以吸得时候要看一下，或是上样前多煮一下，就行了
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9楼2009-08-24 18:55:01
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by stefa at 2009-8-24 17:32:


可否告知详细的方法和步骤呢  谢谢

用溶菌酶怎么处理啊
是不是先在冰上放置30min后，再在-60度反复冻融几次破碎细胞膜
然后加Triton Dnase Rnase等试剂呢？
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10楼2009-08-24 19:21:37
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