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冷月5565

木虫 (职业作家)

[交流] 关于AflII酶切屡次不成功的原因

我近期用宝生物(大连)生产的AflII对一个有插入片段的pMD8-T质粒做单酶切。而且酶切片段混乱。
AflII酶切位点在插入片段上,插入片段约200bp,插入于EcoRV克隆位点上。
所用Buffer为百分之0.1BSA和10XM。
请问列位专家有没有类似经历?能否帮我分析原因?

[ Last edited by 冷月5565 on 2009-8-24 at 13:43 ]
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gogen

金虫 (小有名气)


冷月5565(金币+1,VIP+0):谢谢! 9-2 10:05
是18T吧?。。切你的片段切不开就是你片段的问题,换个载体切切看看是不是你的片段的问题咯。。也可以换个切点看看,或者换个批次的酶(换好点的酶比如NEB的也行)。。。多多做尝试总能成功的酶切切不动很正常的。。一般最好是曲线救国,达到目的就行了,强搞就算成功了也很费的

[ Last edited by gogen on 2009-8-24 at 18:55 ]
5楼2009-08-24 18:53:19
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

buffer 很重要
请查表"限制酶在各种缓冲液中的相对活性"
2楼2009-08-24 16:38:45
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冷月5565

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by ljsh at 2009-8-24 16:38:
buffer 很重要
请查表"限制酶在各种缓冲液中的相对活性"

谢谢,不过我是按照说明书上的buffer组成来加样的,表的推荐的buffer也是一样。
3楼2009-08-24 17:46:35
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

用其他载体作个对照看看,要是其他载体能切开的话,那可能就是这个载体不好用了,果断换其他的.很有可能这个酶切位点出现变异了.我碰到过这样的情况.

[ Last edited by brightfuture01 on 2009-8-24 at 18:13 ]
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2009-08-24 18:09:52
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