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汕头大学海洋科学接受调剂
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言宸儿

新虫 (初入文坛)

[求助] CRISPR/Cas9敲除 已有1人参与

利用CRISPR/Cas9敲除某20bp的序列,不仅没敲掉却造成这20不怕序列中几个剪辑发生突变,并造成之后的序列频繁发生点突变是什么情况,有人了解可以赐教吗?

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4楼2021-09-13 09:13:13
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言宸儿

新虫 (初入文坛)

利用CRISPR/Cas9敲除某20bp的序列,不仅没敲掉却造成这20bp序列中几个碱基发生突变,并造成之后的序列频繁发生点突变是什么情况,有人了解可以赐教吗?
2楼2021-09-10 21:21:17
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风中你我

银虫 (小有名气)

3楼2021-09-12 15:28:46
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言宸儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sxrvd42 at 2021-09-13 09:13:13
描述的有点不清楚,敲掉20bp,是设计的两个靶点吗?这种精确敲除很难吧,要是单靶点一般还是以点突变和小InDEL为主,缺失的情况也有,就是较少,而且恰好是20bp的概率更小

对的,靶向一个基因设计2个sgRNA,也是为了增加knock out的概率。有试过单靶点,但是在线虫内利用co-CRISPR进行敲除,筛选得到的F1代编辑体数量太少。所以更多用双sgRNA敲除。
5楼2021-09-13 19:08:31
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