| 查看: 896 | 回复: 16 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
yuebanwan金虫 (正式写手)
|
[交流]
PCR污染或药品问题
|
||
|
1、在做转基因检测时，发现阴性对照及水也跑出条带来，开始以为是水的问题，换了还是存在；后来又以为是药品的问题，除了引物及酶都换了还是存在；后来，引物（743bp）也换了，还做了56、57、58。C三个温度，结果56是没有了，57、58还是有（且水的体系用的是早上56摄氏度时剩下的，中间间隔3~4h），何解？ 2、就是跑出来的，带也与预期的743bp大小不一样，大部分时候还在Marker的750bp带以上，为什么？ 3、有对引物（832bp）老是跑不出来，温度从54、55、56、57、58摄氏度五个梯度都P不出来，何故？ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
filecode
已经有12人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
filecode=后面第一个是大写字母
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有6人回复
16楼2009-08-21 00:43:24
liubing041
荣誉版主 (文坛精英)
忽忽家族之傻忽忽
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 4.154
- 金币: 11318.2
- 散金: 25993
- 红花: 74
- 沙发: 1484
- 帖子: 36838
- 在线: 1095.2小时
- 虫号: 377422
- 注册: 2007-05-20
- 性别: GG
- 专业: 化学工程及工业化学
- 管辖: 教师之家
2楼2009-08-18 09:33:32
xiaoyadxy
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1424.5
- 帖子: 137
- 在线: 26小时
- 虫号: 412098
- 注册: 2007-06-25
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2009-08-18 09:42:37
傻子
木虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 2588.2
- 散金: 23
- 红花: 1
- 帖子: 622
- 在线: 213.1小时
- 虫号: 339910
- 注册: 2007-04-07
- 性别: GG
- 专业: 临床分子生物学检验
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yuebanwan(金币+5):谢谢参与
yuebanwan(金币+10,VIP+0): 8-21 16:10
yuebanwan(金币+5):谢谢参与
yuebanwan(金币+10,VIP+0): 8-21 16:10
|
1、在做转基因检测时，发现阴性对照及水也跑出条带来，开始以为是水的问题，换了还是存在；后来又以为是药品的问题，除了引物及酶都换了还是存在；后来，引物（743bp）也换了，还做了56、57、58。C三个温度，结果56是没有了，57、58还是有（且水的体系用的是早上56摄氏度时剩下的，中间间隔3~4h），何解？ --这个感觉是否是电泳上样有些问题，如果正常的话水是不会出现条带，上样小心样品飘出污染到旁边的孔，试试隔几个孔点，同时将电泳缓冲液更换新的，以前作出过什么都不加就有条带的电泳……另外对于PCR，不哟啊仅局限于调整退火温度，试试更换试剂等多种方法尝试实验后分析，我出现过dNTP 出问题检测了好久才找出来原因。或者重新合成引物，放久了也有失效的可能。 2、就是跑出来的，带也与预期的743bp大小不一样，大部分时候还在Marker的750bp带以上，为什么？ --这个不好确定原因，自己出现过这样的，但不是说这样的就能认为是正常结果，建议将条带回收测序验证下。 3、有对引物（832bp）老是跑不出来，温度从54、55、56、57、58摄氏度五个梯度都P不出来，何故？ --如果能保证试剂不出问题的话，试试再将退火温度降低，至45度左右，如果能出来，看条带是否有符合的，这时候非特异性条带会增多。如果不行，试试重新合成引物。 |
5楼2009-08-18 10:36:21
