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北京艾柏森铁虫 (小有名气)
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如何利用多色流式细胞术筛选抗体分泌B细胞
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B细胞对抗原的免疫应答有两种情况：一种是胸腺非依赖性抗原（thymus-independent antigen，TI抗原），大多为多糖类和脂类抗原，不需要T细胞的辅助，就可直接激活B细胞产生IgM类抗体，主要由B1细胞介导，其抗原受体多样性有限，特异性差；另一种是胸腺依赖性抗原（thymus-dependent antigen，TD抗原），为蛋白类抗原，主要由B2细胞介导，激活B细胞发生免疫应答需要T细胞的辅助，其间会经历抗体亲和力成熟、类别转换和记忆B细胞形成等过程。 所以在B细胞的分化过程主要可分为前B细胞（Pre-B cell）、不成熟B细胞(immature B cell)、成熟B细胞(mature B cell)、活化B细胞(activated B cell)和浆细胞(plasma cell)五个阶段。其中前B细胞和不成熟B细胞的分化是胸腺非依赖性的，其分化过程在骨髓中进行。胸腺依赖阶段是指成熟B细胞在抗原刺激后活化，在抗原提呈细胞和Th细胞的辅助下成为活化B细胞，进而分化为合成和分泌抗体的浆细胞，这个阶段的分化主要是在外周免疫器官中进行的。 B细胞分化的各个阶段可以通过评估不同的细胞表面标志物的表达和水平来确定，这些标志物的表达和水平在B细胞分化的整个过程中都受到调节。前B细胞胞浆中可检测到IgM的重链u链，但无轻链，也无膜表面Ig的表达，因此缺乏对抗原的反应能力。末端脱氧核甘酸转移酶（terminal deoxy nucleotidyl transferase TdT）以及CD10可表达在前B细胞，进入非成熟B细胞后这两种标志即消失，因此TdT和CD10对于区分前B细胞与B细胞其它发育阶段非常有用。CD19、CD20和MHCI类抗原在此阶段开始表达。前B细胞对抗原无应答能力；不成熟B细胞开始表达mIgM，但如与抗原结合，则产生负应答，使B细胞转变为受抑制状态，不能继续分化为成熟的B细胞，这是形成自身免疫耐受的机制之一，CD19、CD20和MHCI类抗原表达量增加，并可开始表达CD21抗原；骨髓中发育成熟B细胞经血液迁移至外周淋巴器官，此时膜表面同时表达mIgM和mIgD，mIgD的表达防止了B细胞与抗原结合后所引起的免疫耐受；成熟B细胞接受抗原刺激后，在抗原提呈细胞和Th细胞的辅助下成为活化B细胞，进而分化为浆细胞，合成和分泌各类免疫球蛋白，同时获得了PC-1等浆细胞特异性标志，而mIg，MHCI类抗原、CD19、CD20、CD21等标记消失。 由此可知，B细胞及其分化亚群可以根据细胞表面表达的不同标志物而区分。选择这些结合了荧光的抗体直接标记这些标志物之后，就可以通过多色流式分析技术实现对抗体分泌B细胞的筛选。 |
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