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0000零

新虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母菌落PCR 已有1人参与

请问我从酿酒酵母里扩的东西条带都很淡怎么办?我模板是从平板上挑取的单菌落,加适量超纯水混匀后100度煮20分钟左右,离心后取2微升做模版。我用了高保真酶和普通酶,条带都很淡,不同的退火温度也尝试了(做过梯度温度)。不止一个基因,我扩的好几个基因条带都很浅。求大神指导

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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)


淡的一般都是非特异性带

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2楼2021-08-01 13:10:48
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vigdoo

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们用的是20mM的氢氧化钠,也不知道你的体系是多大,2微升有点多,有时模板浓度高了也有问题,还有引物
3楼2021-09-18 17:35:20
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