24小时热门版块排行榜    

查看: 723  |  回复: 12
当前主题已经存档。

greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 酶切反应时酶液还用稀释吗?

我现在做质粒的酶切,买的是NEB的酶,浓度是10×的,做了两次酶切不成功。上面也没有详细的使用说明,我之前也没做过这类实验不知道如何做。我想知道除了反应时取2μl酶液,DNA及d水组成20μl的反应体系外,还用专门稀释原始酶液吗?再就是我也看到有的资料中写到将“市场销售的酶一般浓度很大,为节约起见,使用时可事先用酶反应缓冲液(1×)进行稀释。”这里说的酶反应缓冲液指的是什么?NEB说明书中也有提到“dilution buffer”指的是这个吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 20:40
可以稀释也可以不稀释吧
我们做都是不稀释的  一般20微升体系加0.2微升就够了
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-08-17 16:41:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cauzhangtao

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
基本不稀释,稀释干吗?
3楼2009-08-17 16:51:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

illcf_11

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我不但不稀释,还常常超标用的……
4楼2009-08-17 20:07:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjwang

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不用加buffer吗?2ul酶液是不是多了阿
5楼2009-08-18 16:57:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你有没有加buffer?除了反应时取2μl酶液,DNA及d水组成20μl的反应体系外,还应该加buffer吧?
一个人可以不成功,但不可以不成长!
6楼2009-08-18 17:03:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

paulajjh

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不稀释,酶量我一般用2ul,当反应体系加大时,酶量可以适当减少。质粒酶切效果怎么看,你切出来的片段如果有个片段很小,是无法得知酶切是否成功的。只好胶回收时取条带偏下的那部分
7楼2009-08-18 17:27:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytmito1986

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不稀释,一般的酶要是稀释的话,要自己配相关的稀释液的
8楼2009-08-18 17:44:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不稀释,用的酶液有点多了吧,有的酶与buffer是混合好的,就不用再加buffer了
9楼2009-08-18 21:13:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)

加了buffer的。
10楼2009-08-18 22:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greatsaint 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-23 3/150 2026-03-24 20:25 by 汪!?!
[考研] 求调剂 +6 研研,接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 284求调剂 +10 Zhao anqi 2026-03-22 10/500 2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 材料专业求调剂 +11 hanamiko 2026-03-18 11/550 2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见