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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 酶切反应时酶液还用稀释吗?

我现在做质粒的酶切,买的是NEB的酶,浓度是10×的,做了两次酶切不成功。上面也没有详细的使用说明,我之前也没做过这类实验不知道如何做。我想知道除了反应时取2μl酶液,DNA及d水组成20μl的反应体系外,还用专门稀释原始酶液吗?再就是我也看到有的资料中写到将“市场销售的酶一般浓度很大,为节约起见,使用时可事先用酶反应缓冲液(1×)进行稀释。”这里说的酶反应缓冲液指的是什么?NEB说明书中也有提到“dilution buffer”指的是这个吗?
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houjinglhy

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司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 20:40
可以稀释也可以不稀释吧
我们做都是不稀释的  一般20微升体系加0.2微升就够了
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-08-17 16:41:30
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)


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基本不稀释,稀释干吗?
3楼2009-08-17 16:51:33
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illcf_11

银虫 (初入文坛)


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我不但不稀释,还常常超标用的……
4楼2009-08-17 20:07:52
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zjwang

木虫 (正式写手)


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不用加buffer吗?2ul酶液是不是多了阿
5楼2009-08-18 16:57:06
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)


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你有没有加buffer?除了反应时取2μl酶液,DNA及d水组成20μl的反应体系外,还应该加buffer吧?
一个人可以不成功,但不可以不成长!
6楼2009-08-18 17:03:22
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paulajjh

木虫 (著名写手)


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不稀释,酶量我一般用2ul,当反应体系加大时,酶量可以适当减少。质粒酶切效果怎么看,你切出来的片段如果有个片段很小,是无法得知酶切是否成功的。只好胶回收时取条带偏下的那部分
7楼2009-08-18 17:27:33
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ytmito1986

金虫 (小有名气)


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不稀释,一般的酶要是稀释的话,要自己配相关的稀释液的
8楼2009-08-18 17:44:30
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忘记将来

木虫 (正式写手)


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不稀释,用的酶液有点多了吧,有的酶与buffer是混合好的,就不用再加buffer了
9楼2009-08-18 21:13:47
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greatsaint

银虫 (小有名气)

加了buffer的。
10楼2009-08-18 22:24:12
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