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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切反应时酶液还用稀释吗？
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by greatsaint at 2009-8-17 16:37:
我现在做质粒的酶切，买的是NEB的酶，浓度是10×的，做了两次酶切不成功。上面也没有详细的使用说明，我之前也没做过这类实验不知道如何做。我想知道除了反应时取2μl酶液，DNA及d水组成20μl的反应体系外，还用专 ...

我买的NEB都有详细使用方法，看你的描述很有问题。“买的是NEB的酶，浓度是10×的”，10X是指buffer，而不是酶的浓度。
如果20ul的反应体系，则只需加2ul 10x buffer，酶便宜的加1-2ul，贵的0.1-0.5ul，剩下的只加质粒和水。有些时候NEB要加BSA，不过说明里肯定有。再者你完全可以上NEB网站查询，酶在不同的buffer里活性差别会很大的。
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11楼2009-08-19 09:26:41
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synhily

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不用稀释，20微升体系中加0.5微升的酶足够了。
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12楼2009-08-19 09:34:19
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greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dnaxxx at 2009/8/19 09:26:



我买的NEB都有详细使用方法，看你的描述很有问题。“买的是NEB的酶，浓度是10×的”，10X是指buffer，而不是酶的浓度。
如果20ul的反应体系，则只需加2ul 10x buffer，酶便宜的加1-2ul，贵的0.1-0.5ul，剩 ...

谢谢!嗯，好像buffer是10×的，可能是我看错了。
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13楼2009-08-19 10:17:48
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