应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 想用biobrick（生物砖）快速构建多拷贝，但构不出来
51/1返回列表
查看: 2108  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者pinkzou将赠送您 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

pinkzou

新虫 (初入文坛)

[求助] 想用biobrick（生物砖）快速构建多拷贝，但构不出来 已有1人参与

我先在载体的目的基因的表达框上游加入了EcoR1、Xbal1位点，在下游加入了Spe1和Pst1位点，然后构建了与含目的基因载体不同抗性的含EcoR1、Xbal1、Spe1和Pst1的空载体，选用biobrick的原因是不能做胶回收，因为目的基因与载体的其他部分片段大小相似，做不了胶回收，然后又想快速构建多拷贝质粒。。。。。但是尝试了很多次，无法用biobrick构建。以下是我的具体步骤，请大佬们看看我做的是不是有问题。首先用PCR扩增与目的基因载体不同抗性的载体将其称为B（含目的基因的载体称为A）然后将B的PCR产物做胶回收，然后用EcoE1和Pst1对胶回收产物酶切，用EcoR1和Spe1对A酶切，同时再配一个体系用Xbal1和Pst1对A酶切，然后再将三个酶切产物进行连接转化，但是始终不能得到目的菌株。A载体和B载体如图所示。新人，没啥金币，实在对不住啊

想用biobrick（生物砖）快速构建多拷贝，但构不出来
A


想用biobrick（生物砖）快速构建多拷贝，但构不出来-1
B
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2021-07-30 15:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

啊哈哈i

新虫 (小有名气)
请教一下，我觉得你这样只能得到一个单拷贝的载体，用Xbal1和Pst1酶切的片段是怎么连上呢载体的呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2022-07-22 10:27:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lixinlihu

金虫 (正式写手)
感觉描述的有问题。不知道为何不用如今成熟的一步克隆或者golden gate。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2021-07-31 20:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pinkzou

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lixinlihu at 2021-07-31 20:10:16
感觉描述的有问题。不知道为何不用如今成熟的一步克隆或者golden gate。

因为biobrick不用多次胶回收且不用考虑PCR引入的突变，同时可以快速构建多拷贝
赞一下 回复此楼
3楼2021-09-23 13:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemary

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pinkzou at 2021-09-23 13:27:10
因为biobrick不用多次胶回收且不用考虑PCR引入的突变，同时可以快速构建多拷贝...

求指导 为什么不用考虑PCR引入的突变？
赞一下 回复此楼
4楼2022-05-13 13:13:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 求调剂（材料与化工327） +3 爱吃香菜啦 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:28 by houyaoxu
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 290求调剂 +6 ADT 2026-03-12 6/300 2026-03-13 09:50 by 闲人终南山
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 307求调剂 +3 超级伊昂大王 2026-03-12 3/150 2026-03-12 15:49 by peike
[考研] 285求调剂 +3 柴郡猫_ 2026-03-12 3/150 2026-03-12 15:39 by 布丁aaa
[考研] 0703求调剂 +6 jtyq001 2026-03-10 6/300 2026-03-11 22:18 by peike
[考研] 一志愿江南大学085701环境工程专硕总分287求调剂 +5 18266118446 2026-03-09 5/250 2026-03-11 16:51 by 2020015
[考研] 材料工程307，求调剂 +7 我要燃烧你的梦 2026-03-08 7/350 2026-03-11 09:09 by 剑诗杜康
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
[硕博家园] 木虫好像不热闹了，是不是？ +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
[考研] 293求调剂 +4 上班不着吉 2026-03-09 4/200 2026-03-09 22:43 by bingxueer79
[考研] 313求调剂 +4 Yyt杨1 2026-03-07 5/250 2026-03-09 13:48 by macy2011
[考研] 293一志愿华东理工 0817化学工程与技术 调剂 +5 fjj0912 2026-03-07 5/250 2026-03-09 09:13 by 30660438
[考研] 347求调剂 +4 浮云满足 2026-03-07 4/200 2026-03-08 16:46 by 星空星月
[考研] 材料化工求调剂 +7 博斯特525 2026-03-06 8/400 2026-03-08 03:51 by lfhuang
[考研] 一志愿武汉理工085601，初试301分，请问能调剂到湖北吗 +3 肖yang 2026-03-06 3/150 2026-03-07 19:08 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭