应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 想用biobrick（生物砖）快速构建多拷贝，但构不出来
51/1返回列表
查看: 2096  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者pinkzou将赠送您 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

pinkzou

新虫 (初入文坛)

[求助] 想用biobrick（生物砖）快速构建多拷贝，但构不出来 已有1人参与

我先在载体的目的基因的表达框上游加入了EcoR1、Xbal1位点，在下游加入了Spe1和Pst1位点，然后构建了与含目的基因载体不同抗性的含EcoR1、Xbal1、Spe1和Pst1的空载体，选用biobrick的原因是不能做胶回收，因为目的基因与载体的其他部分片段大小相似，做不了胶回收，然后又想快速构建多拷贝质粒。。。。。但是尝试了很多次，无法用biobrick构建。以下是我的具体步骤，请大佬们看看我做的是不是有问题。首先用PCR扩增与目的基因载体不同抗性的载体将其称为B（含目的基因的载体称为A）然后将B的PCR产物做胶回收，然后用EcoE1和Pst1对胶回收产物酶切，用EcoR1和Spe1对A酶切，同时再配一个体系用Xbal1和Pst1对A酶切，然后再将三个酶切产物进行连接转化，但是始终不能得到目的菌株。A载体和B载体如图所示。新人，没啥金币，实在对不住啊

想用biobrick（生物砖）快速构建多拷贝，但构不出来
A


想用biobrick（生物砖）快速构建多拷贝，但构不出来-1
B
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2021-07-30 15:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemary

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pinkzou at 2021-09-23 13:27:10
因为biobrick不用多次胶回收且不用考虑PCR引入的突变，同时可以快速构建多拷贝...

求指导 为什么不用考虑PCR引入的突变？
赞一下 回复此楼
4楼2022-05-13 13:13:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lixinlihu

金虫 (正式写手)
感觉描述的有问题。不知道为何不用如今成熟的一步克隆或者golden gate。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2021-07-31 20:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pinkzou

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lixinlihu at 2021-07-31 20:10:16
感觉描述的有问题。不知道为何不用如今成熟的一步克隆或者golden gate。

因为biobrick不用多次胶回收且不用考虑PCR引入的突变，同时可以快速构建多拷贝
赞一下 回复此楼
3楼2021-09-23 13:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

啊哈哈i

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by hemary at 2022-05-13 13:13:16
求指导 为什么不用考虑PCR引入的突变？...

因为他的目的基因是酶切的，不是PCR扩增的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2022-07-22 10:25:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 293求调剂，一志愿陕师大生物学 +3 ??????.?.??? 2026-03-09 3/150 2026-03-11 10:02 by 学员8dgXkO
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 306求调剂 +3 唐薏薏 2026-03-09 3/150 2026-03-10 22:30 by peike
[考研] 一志愿211，0860总分286食品工程专业求调剂 +8 林林Winnie 2026-03-05 8/400 2026-03-10 18:44 by 清风月
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
[考研] 材料与化工，291，求调剂 +12 咕噜咕噜123123 2026-03-05 13/650 2026-03-10 13:50 by allen-yin
[考博] 求材料读博院校 +9 yanglei131 2026-03-08 9/450 2026-03-10 11:54 by 天道酬勤2026686
[硕博家园] 木虫好像不热闹了，是不是？ +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
[考研] 化工284求调剂 +12 小黑想变白 2026-03-07 12/600 2026-03-10 09:17 by Wahxp
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
[考研] 0703求调剂 +10 c297914 2026-03-06 11/550 2026-03-09 18:37 by 30660438
[考研] 290 材料与化工求调剂 +7 Nebulala 2026-03-08 7/350 2026-03-09 05:21 by houyaoxu
[考研] 考研求调剂，工科，总分304 +4 矮子不想长高了 2026-03-08 7/350 2026-03-08 22:21 by 小木虫tim
[考研] 301求调剂 +11 朝天椒的双马尾 2026-03-05 11/550 2026-03-08 21:50 by 知足常乐的乐
[考研] 化学工程与技术316求调剂 +7 Sixuan wang 2026-03-06 7/350 2026-03-08 11:23 by 我的船我的海
[考研] 诚求调剂，323分 有专利/科研/实习经历 +6 橙子cyx 2026-03-06 8/400 2026-03-07 19:06 by 新篇章DFSS
[考研] 08工科求调剂 +3 隆LLL 2026-03-06 4/200 2026-03-06 15:26 by 隆LLL
[考研] 085602高分子方向求调剂 +7 tlgudy 2026-03-04 7/350 2026-03-06 14:17 by guosr9609
[考研] 材料调剂 +5 ws 上岸鸭 2026-03-05 5/250 2026-03-05 20:06 by houyaoxu
[考研] 085602 293分求调剂 +3 SivanNano. 2026-03-05 3/150 2026-03-05 19:41 by caszguilin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭