应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 被DEAE FF折磨吐了
61/1返回列表
查看: 2074  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者gxmpcc将赠送您 10 个金币

gxmpcc

新虫 (初入文坛)

[求助] 被DEAE FF折磨吐了 已有1人参与

请教各位前辈，我目前要纯化一种蛋白，无标签，约60KD，PI5.1

实验步骤如下：

样品处理：

1.组织溶于等体积标准盐溶液（含100mM Kcl）样品洗涤超声离心弃上清取沉淀，重复3次

2.沉淀复悬于5倍体积提取液（含500mmNacl）超声离心弃上清取沉淀，重复2次

3.沉淀复悬于Buffer A（10mM 磷酸二氢钠），超声后过滤膜得上柱样品

柱子为DEAE FF 1ml

平衡和洗脱缓Buffer均为磷酸二氢钠（含8M尿素），分别为10mM和1000mM,PH均为7.0

上柱前曾用BufferA(10mM)平衡20个柱体积至基线平稳，上样量为10ml

洗脱方式为梯度浓度洗脱，以2ml/min，10ml一管收集；梯度浓度设置如下

NO      时间       A%        B%
1           0         100         0
2          30         90         10
3          90         85         15
4         150        80         20  
5         240        60         40
6         300        50         50
7         360        30         70
8         390         0         100

因实验室没有电导仪，所以没有测过电导

出现的问题：
按梯度浓度收集80管样品，总是在第一管出现目的蛋白和一些杂蛋白，后续管里无任何蛋白。尝试过改变PH为6.5，7.5，8.0，结果依然如此。请教各位前辈这是没挂上柱子吗？在不换柱子得情况下有哪些可以改进的地方？
回复此楼

» 本帖@通知

@冼亮淀粉酶

» 猜你喜欢
1楼 2021-07-15 20:18:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
既然你溶解样品没用尿素，你的纯化缓冲为啥要用尿素？变性后的等电点和理论等电点是不一样的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
2楼2021-07-16 09:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gxmpcc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-07-16 09:19:24
既然你溶解样品没用尿素，你的纯化缓冲为啥要用尿素？变性后的等电点和理论等电点是不一样的。

我样品是重悬于Buffer A然后上样的，里面含尿素。只是前面粗提取的过程中没有加尿素
赞一下 回复此楼
3楼2021-07-16 15:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

用的哪家的DEAE-FF，你纯化的目的蛋白是什么，纯度需要多少，收率多少。这些我们都可以给解决，可以做工艺开发，18706882210
赞一下 回复此楼
4楼2021-08-03 10:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1234568a

新虫 (初入文坛)
你好，我想请问一下你的填料是怎么处理再生的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2023-03-05 09:25:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1234568a

新虫 (初入文坛)
你好，请问为什么我过这个柱子出现蛋白在不同浓度梯度下被重复洗脱

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2023-03-27 22:27:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gxmpcc 的主题更新
61/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 5+3 想要一壶桃花水 2026-03-25 7/350 2026-03-26 03:29 by sjeidudkso
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +3 kongweilin 2026-03-26 3/150 2026-03-26 00:53 by 15723253818
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭