| 查看: 1922 | 回复: 5 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者gxmpcc将赠送您 10 个金币 | ||
[求助]
被DEAE FF折磨吐了 已有1人参与
|
||
|
请教各位前辈，我目前要纯化一种蛋白，无标签，约60KD，PI5.1 实验步骤如下： 样品处理： 1.组织溶于等体积标准盐溶液（含100mM Kcl）样品洗涤超声离心弃上清取沉淀，重复3次 2.沉淀复悬于5倍体积提取液（含500mmNacl）超声离心弃上清取沉淀，重复2次 3.沉淀复悬于Buffer A（10mM 磷酸二氢钠），超声后过滤膜得上柱样品 柱子为DEAE FF 1ml 平衡和洗脱缓Buffer均为磷酸二氢钠（含8M尿素），分别为10mM和1000mM,PH均为7.0 上柱前曾用BufferA(10mM)平衡20个柱体积至基线平稳，上样量为10ml 洗脱方式为梯度浓度洗脱，以2ml/min，10ml一管收集；梯度浓度设置如下 NO 时间 A% B% 1 0 100 0 2 30 90 10 3 90 85 15 4 150 80 20 5 240 60 40 6 300 50 50 7 360 30 70 8 390 0 100 因实验室没有电导仪，所以没有测过电导 出现的问题： 按梯度浓度收集80管样品，总是在第一管出现目的蛋白和一些杂蛋白，后续管里无任何蛋白。尝试过改变PH为6.5，7.5，8.0，结果依然如此。请教各位前辈这是没挂上柱子吗？在不换柱子得情况下有哪些可以改进的地方？ |
回复此楼» 本帖@通知
» 猜你喜欢
职称评审没过，求安慰
已经有42人回复
-
回收溶剂求助
已经有7人回复
-
硝基苯如何除去
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有4人回复
-
垃圾破二本职称评审标准
已经有17人回复
-
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿
已经有22人回复
-
EST投稿状态问题
已经有7人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有4人回复
-
求助文献
已经有3人回复
-
三无产品还有机会吗
已经有6人回复
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
2楼2021-07-16 09:19:24
3楼2021-07-16 15:03:26
walking dead
金虫 (小有名气)
填料制备和蛋白纯化专家
- 应助: 40 (小学生)
- 贵宾: 0.001
- 金币: 1354.8
- 散金: 59
- 红花: 17
- 帖子: 287
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 4175016
- 注册: 2015-10-26
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2021-08-03 10:34:35
5楼2023-03-05 09:25:13
6楼2023-03-27 22:27:22