应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 被DEAE FF折磨吐了
61/1返回列表
查看: 2066  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者gxmpcc将赠送您 10 个金币

gxmpcc

新虫 (初入文坛)

[求助] 被DEAE FF折磨吐了 已有1人参与

请教各位前辈，我目前要纯化一种蛋白，无标签，约60KD，PI5.1

实验步骤如下：

样品处理：

1.组织溶于等体积标准盐溶液（含100mM Kcl）样品洗涤超声离心弃上清取沉淀，重复3次

2.沉淀复悬于5倍体积提取液（含500mmNacl）超声离心弃上清取沉淀，重复2次

3.沉淀复悬于Buffer A（10mM 磷酸二氢钠），超声后过滤膜得上柱样品

柱子为DEAE FF 1ml

平衡和洗脱缓Buffer均为磷酸二氢钠（含8M尿素），分别为10mM和1000mM,PH均为7.0

上柱前曾用BufferA(10mM)平衡20个柱体积至基线平稳，上样量为10ml

洗脱方式为梯度浓度洗脱，以2ml/min，10ml一管收集；梯度浓度设置如下

NO      时间       A%        B%
1           0         100         0
2          30         90         10
3          90         85         15
4         150        80         20  
5         240        60         40
6         300        50         50
7         360        30         70
8         390         0         100

因实验室没有电导仪，所以没有测过电导

出现的问题：
按梯度浓度收集80管样品，总是在第一管出现目的蛋白和一些杂蛋白，后续管里无任何蛋白。尝试过改变PH为6.5，7.5，8.0，结果依然如此。请教各位前辈这是没挂上柱子吗？在不换柱子得情况下有哪些可以改进的地方？
回复此楼

» 本帖@通知

@冼亮淀粉酶

» 猜你喜欢
1楼 2021-07-15 20:18:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
既然你溶解样品没用尿素，你的纯化缓冲为啥要用尿素？变性后的等电点和理论等电点是不一样的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
2楼2021-07-16 09:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gxmpcc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-07-16 09:19:24
既然你溶解样品没用尿素，你的纯化缓冲为啥要用尿素？变性后的等电点和理论等电点是不一样的。

我样品是重悬于Buffer A然后上样的，里面含尿素。只是前面粗提取的过程中没有加尿素
赞一下 回复此楼
3楼2021-07-16 15:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

用的哪家的DEAE-FF，你纯化的目的蛋白是什么，纯度需要多少，收率多少。这些我们都可以给解决，可以做工艺开发，18706882210
赞一下 回复此楼
4楼2021-08-03 10:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1234568a

新虫 (初入文坛)
你好，我想请问一下你的填料是怎么处理再生的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2023-03-05 09:25:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1234568a

新虫 (初入文坛)
你好，请问为什么我过这个柱子出现蛋白在不同浓度梯度下被重复洗脱

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2023-03-27 22:27:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gxmpcc 的主题更新
61/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 16/800 2026-03-23 17:45 by 材料学257求调剂
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 10/500 2026-03-23 10:41 by Iveryant
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭