毕赤酵母表达（总是整合不上） - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2009-08-15 10:16:28

tongxiaoxue

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 11.5
帖子: 100
在线: 75.4小时
虫号: 553523
注册: 2008-05-03
专业: 微生物遗传育种学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

我也是醋酸钠沉淀的

赞一下(1人)

12楼2010-07-08 10:50:30

落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

应助: 0 (幼儿园)
金币: 13196.2
散金: 4
帖子: 421
在线: 99.7小时
虫号: 742854
注册: 2009-04-08
性别: MM
专业: 微生物与生化药学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

呃，80度灭酶活是不是太高了点？一般65度就可以了吧。

赞一下(1人)

天涯静处无征战，兵气销为日月光。

13楼2011-03-01 15:30:51

worm2010

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5172.4
散金: 8
帖子: 163
在线: 59.6小时
虫号: 1047693
注册: 2010-06-26
专业: 原子和分子物理

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by zhaocy8903 at 2009-08-14 08:14:45:
参数很正常
酵母菌浓度尽量高一点
载体尽量不含盐
应该没有问题

搭车问一下，重组质粒线性化是不是只能用手册中给的AvrII或BspHI酶进行线性化呢？那线性化之后不需要处理（比如电泳回收）重组质粒了吗直接转到毕赤酵母中吗？

赞一下(1人)

14楼2011-03-11 13:23:18

hulanzi

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 68.6
帖子: 34
在线: 7.2小时
虫号: 1299909
注册: 2011-05-19
专业: 微生物遗传育种学

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+10): 第一天注册，鼓励交流，欢迎常来生物综合版 2011-05-19 21:49:27

注意调整酵母感受态细胞浓度，和线性质粒的浓度，这个对转化也很关键

赞一下(2人)

15楼2011-05-19 19:09:45

learningying

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 5431.9
散金: 323
红花: 33
帖子: 1074
在线: 256.6小时
虫号: 2055341
注册: 2012-10-11
性别: GG
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

1，载体在线性化后纯化的时候用双蒸水洗脱，不含有盐离子。2，载体浓度越高越好，纯化后的DNA浓度在2~5ug 最好。也就是酶切的时候切200 ul体系，纯化到40 ul体系，纯化效率大约是10%.纯化后要检测浓度，不行的话再酶切，大量做两次合在一起使用。基本上都可以长出几十个克隆子。

加油，天道酬勤

16楼2014-10-02 09:40:40

wyfdgg

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: -39.6
帖子: 36
在线: 20.4小时
虫号: 1667881
注册: 2012-03-05
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

转化的体系有问题吗？质粒浓度如何

17楼2015-11-18 13:20:27

MeiPD

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 259.6
散金: 50
红花: 2
帖子: 58
在线: 20.4小时
虫号: 4717447
注册: 2016-05-23
专业: 生物物理、生物化学与分子

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

请问你的质粒浓度怎么保证呢？我也是用这个质粒，可是提取出来的质粒浓度很低

发自小木虫Android客户端

18楼2017-05-19 15:22:32