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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母表达（总是整合不上）
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kitty8682

金虫 (正式写手)
我每次线性化后用氯化钠，无水乙醇沉淀法回收的，电转化效果都很好
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11楼2009-08-15 10:16:28
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tongxiaoxue

铁虫 (小有名气)
★
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我也是醋酸钠沉淀的
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12楼2010-07-08 10:50:30
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长
★
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呃，80度灭酶活是不是太高了点？一般65度就可以了吧。
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天涯静处无征战，兵气销为日月光。
13楼2011-03-01 15:30:51
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worm2010

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2009-08-14 08:14:45:
参数很正常
酵母菌浓度尽量高一点
载体尽量不含盐
应该没有问题

搭车问一下，重组质粒线性化是不是只能用手册中给的AvrII或BspHI酶进行线性化呢？那线性化之后不需要处理（比如电泳回收）重组质粒了吗直接转到毕赤酵母中吗？
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14楼2011-03-11 13:23:18
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hulanzi

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+10): 第一天注册，鼓励交流，欢迎常来生物综合版 2011-05-19 21:49:27
注意调整酵母感受态细胞浓度，和线性质粒的浓度，这个对转化也很关键
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15楼2011-05-19 19:09:45
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learningying

铁杆木虫 (著名写手)
★
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1，载体在线性化后纯化的时候用双蒸水洗脱，不含有盐离子。2，载体浓度越高越好，纯化后的DNA浓度在2~5ug 最好。也就是酶切的时候切200 ul体系，纯化到40 ul体系，纯化效率大约是10%.纯化后要检测浓度，不行的话再酶切，大量做两次合在一起使用。基本上都可以长出几十个克隆子。
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加油，天道酬勤
16楼2014-10-02 09:40:40
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wyfdgg

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转化的体系有问题吗？质粒浓度如何
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17楼2015-11-18 13:20:27
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MeiPD

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你的质粒浓度怎么保证呢？我也是用这个质粒，可是提取出来的质粒浓度很低

发自小木虫Android客户端
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18楼2017-05-19 15:22:32
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