24小时热门版块排行榜    

查看: 2715  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yuweibest

木虫 (正式写手)

[交流] 毕赤酵母表达(总是整合不上) 已有7人参与

我正在做毕赤酵母表达,前面的一些步骤应该没什么问题。重组质粒已经构建好,就是在重组质粒线性化并且电转化毕赤酵母时,在相应的抗性平板上总是张不出菌落!!。也就是线性整合不上去。
  请问哪位大侠做过这方面,给点提高转化率的建议和改进步骤。
   我用的PgapzαA载体,目的片段为2.9KB(比较大)

[ Last edited by silicare on 2011-5-19 at 21:22 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MeiPD

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问你的质粒浓度怎么保证呢?我也是用这个质粒,可是提取出来的质粒浓度很低

发自小木虫Android客户端
18楼2017-05-19 15:22:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

银杏下

金虫 (小有名气)


yuweibest(金币+1,VIP+0): 12-22 10:16
我之前做过毕赤酵母的电转,每次做基本上都成功了,不知道你是怎么处理感受态细胞的,如果这个步骤出现问题很可能出现无法转化成果,另外还要注意线性化的质粒浓度要高些。你的载体2.9KB已经算是最小的一类的毕赤酵母载体了,所以不要担心载体的问题。
2楼2009-08-13 18:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuweibest

木虫 (正式写手)

感受态,我就是按照毕赤酵母操作手册上,离心加水再离心,加山梨醇再离心!不是载体2.9KB!而是目的基因2.9KB!
3楼2009-08-13 19:42:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)

电转时的参数(电压,时间)
4楼2009-08-13 20:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 情人节自我反思:在爱情中有过遗憾吗? +5 瞬息宇宙 2026-02-15 6/300 2026-02-18 12:51 by 月下雪林
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:08 by lotyj5cz79
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 3/150 2026-02-18 06:53 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 00:23 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错,点赞! +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[微米和纳米] 球磨粉体时遇到了大的问题,请指教! 10+3 6sbiam 2026-02-12 15/750 2026-02-16 15:03 by tgzxzqj
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
请填处理意见