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做快速核酸检测需要知道的那些技术（五）
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今天继续分享关于重组酶和聚合酶等温检测的引物探针及实验过程中需要注意的事项等。 1、重组酶和聚合酶等温检测基础跑胶反应单元在用酚氯仿抽提后，离心后上清很少，白色层很多，怎么解决？ 遇到这种情况，把反应单元重新充分混匀、离心即可。 2、引物探针软件，我们用肉眼。用Amplifx评估，评估探针与上下游引物之间的二聚体情况，还有自身是否会形成二聚体之类的。 如果二聚体没有问题，就在距离3,端15个碱基的地方用THF替换一个碱基，然后5，端标记FAM，3,端封闭；下游引物5,端，标记生物素。 HF替换碱基有要求，没有替换一个。 3、重组酶和聚合酶等温检测曲线是x的y次方，不是PCR的2的n次方曲线 S曲线和引物有关系，好的引物浓度越好大概率有S。引物越好，灵敏度越高 4.关于管材问题 一般分为顶部采光和底部采光；一般来说PCR仪器都是顶部采光需要盖子透明；底部需要管身透明。不能全透明，全透明反射光弱，采集到的光就弱，灵敏度就会下降。 |
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