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做快速核酸检测需要知道的那些技术（四）
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今天继续分享关于重组酶和聚合酶等温检测的扩增产物及实验过程中需要注意的事项等。 1、重组酶和聚合酶等温检测的扩增产物是否可以进行测序? 可以。可以使用重组酶和聚合酶等温检测基础试剂盒，扩增产物可以经纯化后进行直接测序。 不可以。可以使用重组酶和聚合酶等温检测荧光试剂盒，其扩增产物不可以进行测序，这是因为在荧光试剂盒中使用了核酸外切酶，会对扩增产物进行消化。 2、重组酶和聚合酶等温检测扩增产物跑胶前需要纯化吗？ 需要。重组酶和聚合酶等温检测反应体系里的成分会干扰正常的琼脂糖凝胶电泳，如果不进行反应产物回收，跑出来的可能是弥散条带。 建议用Tris饱和酚和氯仿按1：1的比例进行混合，或可以采用PCR产物纯化试剂盒。 3、重组酶和聚合酶等温检测是否可以采用染料(染色剂)进行检测？ 可以。不过，就像 PCR一样，这种染料通常可以结合到任何双链 DNA上，因此引物干扰会产生假阳性信号。引物干扰在较低的温度下会更严重一些，因此，不推荐将插入性染料用于这类试剂盒。 4、重组酶和聚合酶等温检测里的酶量可以调整吗？ 如果是成品试剂盒，最好不要调整，重组酶和聚合酶等温检测反应体系中的酶量是测试的最佳的浓度，一般情况下是不进行调整的。 5、重组酶和聚合酶等温检测的反应缓冲液可以多加或少加吗？ 如果是成品试剂盒的话，反应缓冲液的量是配套体系最佳的量，最好不要多加或少加。 6、重组酶和聚合酶等温检测反应时需要反应4分钟之后拿出来混匀吗？ 需要。如果扩增的模板浓度很高，可以省略该步骤，一般情况下，反应4分钟之后需拿出来进行混匀离心，使反应组分充分混合，达到最佳的效果。 |
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