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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » EXPAR指数扩增的问题~各位多多帮忙
汕头大学海洋科学接受调剂
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早日上岸

新虫 (小有名气)

[求助] EXPAR指数扩增的问题~各位多多帮忙 已有1人参与

为什么荧光定量结果表明没有扩增呢？
           我的靶引物和模板浓度为0.1μM，是不是有点低啊。体系为20μL
           还有就是模板的3端是否需要P修饰呢，我看有的文献修饰，有的没有。
  救救孩子吧
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1楼 2021-05-19 15:57:47
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早日上岸

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2021-05-25 09:07:06
如果是根据PNAS那篇文章里面提到的有: (1) nickase, (2)聚合酶, (3)引物或者靶标序列内含有切口没识别序列, (4)反应条件(buffer,尤其镁离子浓度, 盐浓度, pH值等), 一个个排除吧

自己混的试剂,没有对比试剂,摸索 ...

谢谢~已经扩出来啦嘻嘻嘻
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5楼2021-05-31 08:55:02
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒模板么，浓度多高？

试剂是买的自己配，还是预混试剂直接用的？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2021-05-19 16:56:47
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早日上岸

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2021-05-19 16:56:47
质粒模板么，浓度多高？

试剂是买的自己配，还是预混试剂直接用的？

不是质粒，就是自己设计合成的单链DNA，终浓度为0.1μM，试剂是自己混的
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3楼2021-05-24 10:02:22
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果是根据PNAS那篇文章里面提到的有: (1) nickase, (2)聚合酶, (3)引物或者靶标序列内含有切口没识别序列, (4)反应条件(buffer,尤其镁离子浓度, 盐浓度, pH值等), 一个个排除吧

自己混的试剂,没有对比试剂,摸索会麻烦一下,good luck!
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2021-05-25 09:07:06
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