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winnerwfy

新虫 (初入文坛)

[求助] 枯草芽孢杆菌整合型质粒电转化效率已有3人参与

请问有做过枯草芽孢杆菌整合型质粒pAX01和pDG1730的电转化的吗?同样的过程,电转化加入300ng质粒,游离型质粒能长上百个,整合型的却一个不长,是不是需要更多的质粒,这样的结果表明转化效率低还是整合效率极低?
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dskfhe123

新虫 (初入文坛)

最近也在做枯草芽孢杆菌的电转实验,但做了很久只成功过一两次,目前遇到以下问题:
1、电击时间常数达不到4ms,使用的是biorad的micropulser,应该用哪个程序会比较好?我目前使用Agr的预设程序,2.2kv,0.1cm电击杯
2、电转后挑的菌摇不起来,很清澈,或者是需要摇很久才浑浊,是电转的质粒影响菌的生长还是电转复苏的问题?我用的是RM培养基(加了海藻糖),100rpm,37度复苏

请大家帮帮忙~~
在课题组只有我一人做枯草芽孢杆菌,能请教的人实在不多

发自小木虫IOS客户端
4楼2021-10-10 13:45:18
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mengyouren

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

游离质粒转化没问题,整合质粒可考虑是否做了线性化后再转化,转化效率和整合效率可能都会提高
2楼2021-07-14 11:41:17
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ggdy3478

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

兄弟你好,我们也在做这个整合实验,发现能长单克隆,但发酵没有产物,请问你的枯草芽孢杆菌能否借一份给我们试试,我们的和你们的一起转化,转化子再给你们寄过去。非常谢谢。

[ 发自手机版 https://muchong.com/3g ]
青椒一个
3楼2021-07-15 05:54:50
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yyyycc2021

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问楼主成功了吗,我们也是这个整合型质粒,自然转化效率比较高,可以考虑换一个方法
5楼2022-07-28 18:05:43
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