24小时热门版块排行榜    

查看: 1590  |  回复: 5
【悬赏金币】回答本帖问题,作者winnerwfy将赠送您 20 个金币

winnerwfy

新虫 (初入文坛)

[求助] 枯草芽孢杆菌整合型质粒电转化效率 已有3人参与

请问有做过枯草芽孢杆菌整合型质粒pAX01和pDG1730的电转化的吗?同样的过程,电转化加入300ng质粒,游离型质粒能长上百个,整合型的却一个不长,是不是需要更多的质粒,这样的结果表明转化效率低还是整合效率极低?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mengyouren

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

游离质粒转化没问题,整合质粒可考虑是否做了线性化后再转化,转化效率和整合效率可能都会提高
2楼2021-07-14 11:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggdy3478

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

兄弟你好,我们也在做这个整合实验,发现能长单克隆,但发酵没有产物,请问你的枯草芽孢杆菌能否借一份给我们试试,我们的和你们的一起转化,转化子再给你们寄过去。非常谢谢。

[ 发自手机版 https://muchong.com/3g ]
青椒一个
3楼2021-07-15 05:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dskfhe123

新虫 (初入文坛)

最近也在做枯草芽孢杆菌的电转实验,但做了很久只成功过一两次,目前遇到以下问题:
1、电击时间常数达不到4ms,使用的是biorad的micropulser,应该用哪个程序会比较好?我目前使用Agr的预设程序,2.2kv,0.1cm电击杯
2、电转后挑的菌摇不起来,很清澈,或者是需要摇很久才浑浊,是电转的质粒影响菌的生长还是电转复苏的问题?我用的是RM培养基(加了海藻糖),100rpm,37度复苏

请大家帮帮忙~~
在课题组只有我一人做枯草芽孢杆菌,能请教的人实在不多

发自小木虫IOS客户端
4楼2021-10-10 13:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyyycc2021

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问楼主成功了吗,我们也是这个整合型质粒,自然转化效率比较高,可以考虑换一个方法
5楼2022-07-28 18:05:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyyycc2021

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dskfhe123 at 2021-10-10 13:45:18
最近也在做枯草芽孢杆菌的电转实验,但做了很久只成功过一两次,目前遇到以下问题:
1、电击时间常数达不到4ms,使用的是biorad的micropulser,应该用哪个程序会比较好?我目前使用Agr的预设程序,2.2kv,0.1cm电击 ...

您好 请问您现在转化成功了吗,用的质粒和菌株是什么呢?
6楼2022-07-28 18:09:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 winnerwfy 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +4 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-08 14:29 by 布布和一二
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[找工作] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 10:39 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见