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电子显微镜

新虫 (初入文坛)

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[求助] 质粒手提求助已有1人参与

最近一直都在做质粒扩增提取，用的是碱裂解法，但是跑电泳都没有条带，完全空的那种。具体操作是先离心获得菌体沉淀，然后加250μl p1，250μl p2，350μl p3，13000rpm离心10min，往上清中加异丙醇后冰浴10min，再离心，最后用70%乙醇清洗，加20μl水后跑电泳检测。麻烦各位大佬帮忙看看，哪一步出现了问题？谢谢?

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1楼 2021-05-09 14:34:24

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tjj451679479

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

首先，能买试剂盒就买个吧，国产的就行了，也不贵；其次如果是必须手提且确认碱裂解过程可靠无误的话，请注意上清加入异丙醇之后会有质粒析出，需轻轻颠倒或吹吸（别用枪头用一次性滴管）混匀至析出肉眼不可见；最后，加入70%乙醇漂洗离心后EP管（最好1.5mL）底部会有析出沉淀，请用不褪色记号笔在EP管外表面圈出其位置，再在生物安全柜之类的大风力且洁净的设备内吹干至沉淀透明不可见，此后再用ddH2O复溶。