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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于8M尿素的问题
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GinTonic

金虫 (小有名气)

[交流] 关于8M尿素的问题

最近在纯化带有his标签的融合蛋白，用的是变性方法，现在的问题是纯化出来的蛋白经透析除掉8M尿素后，蛋白不溶于普通的PBS buffer，这样该如何测蛋白浓度？如何去打兔子制备抗体啊
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1楼 2009-08-11 14:15:15
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果不复性的话只有用电泳来估计一下了
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2楼2009-08-11 14:37:56
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qdwmq

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
蛋白不溶于普通的PBS buffer是沉淀的意思么？
那样的话使蛋白浓度太高了。
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3楼2009-08-30 00:22:02
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
蛋白没有复性
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4楼2009-08-30 07:53:57
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t85434577563

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用尿素重新溶解后加入终浓度为千分之1的SDS，应该不会沉淀，然后透析到PBS，最后由BCA的方法测定蛋白浓度，蛋白溶液中的SDS不会影响免疫效果
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5楼2009-08-30 08:08:08
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
免疫的话直接用变性的免疫也可以啊，没必要透析除尿素的。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
6楼2009-08-30 08:27:51
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计你是在变性之后没有复性吧，复性之后在溶解。
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7楼2009-08-30 09:05:12
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
含有尿素的话会不会影响免疫的效果，兔子会不会死啊？
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8楼2009-08-30 09:19:26
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
由8M尿素 直接稀释到 实测pH 8.5左右的 含有 0.5 M尿素的 PBS中， 蛋白一般不会洗出来。

这个稀释液或透析液就可以用来做实验啦。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
9楼2009-08-30 10:05:35
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GinTonic

金虫 (小有名气)
0.5M的尿素不会对兔子有影响吧
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10楼2009-08-30 15:48:47
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