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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 细菌基因敲除的接合筛选
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湛西

新虫 (小有名气)

[求助] 细菌基因敲除的接合筛选 已有1人参与

我在做一个弧菌的基因敲除，使用的是利用自杀质粒的双交换同源重组方法。我将含有重组质粒的大肠杆菌和弧菌涂布到双抗板(弧菌抗氨苄，质粒上有卡那的抗性基因)上后，取长出来的菌做pcr，引物是融合同源臂两端的引物，理论上条带应该有两条，一条是融合同源臂的，一条是上下同源臂间夹着待敲除基因的。但现在只有融合同源臂的条带，我想请问下大家这是怎么回事，是因为自杀质粒选的不好导致它复制了吗？急，请求大家的帮助。

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1楼 2021-04-29 09:54:22
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阿维Vee

新虫 (小有名气)
我们也会这样，可以挑取做下去试试看，应该是问题不大的

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3楼2021-05-15 11:28:33
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xhl1024

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也遇到相同的问题，楼主解决了嘛？我一直没法确定是否单交换成功了。
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4楼2021-09-04 10:45:56
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