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湛西

新虫 (小有名气)

[求助] 细菌基因敲除的接合筛选已有1人参与

我在做一个弧菌的基因敲除,使用的是利用自杀质粒的双交换同源重组方法。我将含有重组质粒的大肠杆菌和弧菌涂布到双抗板(弧菌抗氨苄,质粒上有卡那的抗性基因)上后,取长出来的菌做pcr,引物是融合同源臂两端的引物,理论上条带应该有两条,一条是融合同源臂的,一条是上下同源臂间夹着待敲除基因的。但现在只有融合同源臂的条带,我想请问下大家这是怎么回事,是因为自杀质粒选的不好导致它复制了吗?急,请求大家的帮助。

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hopegate

捐助贵宾 (小有名气)

内容已删除
2楼2021-05-11 16:06:37
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阿维Vee

新虫 (小有名气)

我们也会这样,可以挑取做下去试试看,应该是问题不大的

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3楼2021-05-15 11:28:33
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xhl1024

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也遇到相同的问题,楼主解决了嘛?我一直没法确定是否单交换成功了。
4楼2021-09-04 10:45:56
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