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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pEASY-Blunt平末端连接，板子上比我脸还干净
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525610427

新虫 (初入文坛)

[求助] pEASY-Blunt平末端连接，板子上比我脸还干净 已有1人参与

我使用的是TransGene的pEASY-Blunt载体，感受态用的是生工的
目的基因PCR产物为20ul，我取了5ul电泳检测，条带正确
然后取PCR产物3ul和vector1ul混合（我怀疑就是目标片段浓度太大，导致我的失败），25℃15min，
后续的转化完全按说明书转化，没有任何改变，但是涂板以后，板子比我脸还干净。

我想试着降低目标片段的浓度，但是网上有人说由于高盐体系，核酸定量仪的取值不可取。


求求各位了
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1楼 2021-04-27 10:56:37
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有所为4312

新虫 (小有名气)
之前载体和片段同源重组的时候，也遇到过片段太多而未有阳性克隆的现象，建议减少片段浓度，但又不能太低，尝试多几种比例试试，每个都涂板看看

发自小木虫Android客户端
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2楼2021-04-27 23:57:38
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tjj451679479

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果片段大小超过3kb或者GC含量高的话，改为37℃反应并适当延长反应时间（仅为一种可能，请谨慎采纳）
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3楼2021-04-28 11:39:40
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fengxueren

新虫 (正式写手)
操作

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4楼2022-01-04 00:25:11
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