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525610427

新虫 (初入文坛)

[求助] pEASY-Blunt平末端连接,板子上比我脸还干净 已有1人参与

我使用的是TransGene的pEASY-Blunt载体,感受态用的是生工的
目的基因PCR产物为20ul,我取了5ul电泳检测,条带正确
然后取PCR产物3ul和vector1ul混合(我怀疑就是目标片段浓度太大,导致我的失败),25℃15min,
后续的转化完全按说明书转化,没有任何改变,但是涂板以后,板子比我脸还干净。

我想试着降低目标片段的浓度,但是网上有人说由于高盐体系,核酸定量仪的取值不可取。


求求各位了
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有所为4312

新虫 (小有名气)

之前载体和片段同源重组的时候,也遇到过片段太多而未有阳性克隆的现象,建议减少片段浓度,但又不能太低,尝试多几种比例试试,每个都涂板看看

发自小木虫Android客户端
2楼2021-04-27 23:57:38
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tjj451679479

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果片段大小超过3kb或者GC含量高的话,改为37℃反应并适当延长反应时间(仅为一种可能,请谨慎采纳)
3楼2021-04-28 11:39:40
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fengxueren

新虫 (正式写手)

4楼2022-01-04 00:25:11
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