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饿的神啊

新虫 (著名写手)

[求助] 真菌基因组DNA电泳无条带，急求帮助 已有2人参与

半个月前用ctab法提取了镰刀菌的dna，用nanodrop检测了浓度，基本在1000ng/ul，260/230在1.8-2.0之间，当时认为质量不错，没有电泳检测，将dna稀释后做了pcr模板，扩增结果也很好。
真菌基因组DNA电泳无条带，急求帮助
      直到这两天打算做southern blot，预酶切用了3种酶，dna模板量用了2ug，酶切过夜后电泳无结果。次日将dna模板加到了10-20ug，酶切后浓缩酶切产物，电泳也无结果。
1、2、3为10ugdna模板对应3种酶的酶切产物；4为10ug dna（未酶切）；5、6、7为20ugdna模板对应3种酶的酶切产物
真菌基因组DNA电泳无条带，急求帮助-1
       我一度怀疑是用的酶不对，直到我把没有稀释的dna（未酶切）一起电泳，结果电泳结果只有100bp的位置有一团，我才意识到我的dna模板有问题。1、3为同一模板，浓度为550ng/ul，上样量分别为5ul和1ul；2、4为同一模板，浓度为1200ng/ul，上样量分别为5ul和1ul。
真菌基因组DNA电泳无条带，急求帮助-2
       怎么这么邪门呀，稀释30多倍pcr扩增都很好，怎么电泳一点都没有呢？急求帮助！@biostar2009@wizardfan
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1楼 2021-04-21 18:14:01
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 屎胖纸 at 2021-04-22 20:28:41
你这个dna电泳，明显没有提出来呀，做southern肯定是要先电泳看条带亮度，单一无杂带。你pcr那个是不准的吧，pcr有时候只需要有一点点片段，都能扩出来。

可是nanodrop测浓度很好，比值也很好，怎么电泳会一点条带都没有呢，以前从没有遇到这个情况。

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3楼2021-04-22 22:26:58
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屎胖纸

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个dna电泳，明显没有提出来呀，做southern肯定是要先电泳看条带亮度，单一无杂带。你pcr那个是不准的吧，pcr有时候只需要有一点点片段，都能扩出来。
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2楼2021-04-22 20:28:41
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rhapsody007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
饿的神啊: 金币+100, ★有帮助 2021-05-25 16:07:03
nanodrop好≠电泳好，电泳不好≠nanodrop不好，这两个应该用来互相印证。
“半个月前用ctab法提取了镰刀菌的dna”，是不是把DNA放-20了，冻融影响了？
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吉恩特磁珠
4楼2021-04-23 14:51:06
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