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求助:POD酶的测定
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我最近在测植物中POD酶的含量,采用的方法如下:称取5.0g植物叶片,切碎,放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成浆。将匀浆液全部转入离心管中,于3000g离心10min,上淸液转入25ml容量瓶中。沉淀用5ml PBS缓冲液再提取两次,上淸液并入容量瓶中,定容至刻度低温下保存备用。酶活性测定的反应体系包括:2.9mlPBS缓冲液、1.0ml2%H2O2、1.0ml0.05mol/L愈创木酚和0.1ml酶液,用酒精灯加热煮沸的酶液为对照。470nm波长下比色,每隔1min记录一次吸光度,共记录5次。 我不知道这个方法是否有缺陷,每次在煮沸对照酶液的时候,原本透明的对照酶液一经加热,就会变成淡淡的乳白色, 然后以它为对照,在紫外分光光度计上测定别的样品液的时候,样品液的吸光值就是负值, 而且样品液在试管中没有问题,可是倒入比色皿、放入紫外分光光度计中后,就会产生很多小气泡,也不知道该怎么处理,请问大家有什么好的方法吗?就是1.解决POD酶含量的测定问题;2.解决比色皿中不断产生小气泡的问题。多谢多谢![ Last edited by skywalkerelf on 2009-8-10 at 11:12 ] |
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然后以它为对照,在紫外分光光度计上测定别的样品液的时候,样品液的吸光值就是负值,
而且样品液在试管中没有问题,可是倒入比色皿、放入紫外分光光度计中后,就会产生很多小气泡,也不知道该怎么处理,请问大家有什么好的方法吗?就是1.解决POD酶含量的测定问题;2.解决比色皿中不断产生小气泡的问题。多谢多谢!
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