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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » his蛋白挂柱效率低
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

[求助] his蛋白挂柱效率低 已有1人参与

C端6xhis蛋白（108kda）纯化时，使用GE的6FF树脂，载量为每毫升树脂载40mg标签蛋白，确定不过载。
且质粒测序结果正确，ORF框及his标签均正确。
尝试将his标签增加至10his，或在N端再添加
6xhis后，仍在流出液中有大量目的蛋白存在。

改变上柱的粗酶液的浓度及上样标签蛋白量也没能改善
求助该如何解决呢

his蛋白挂柱效率低


his蛋白挂柱效率低-1


@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端
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1楼 2021-04-18 23:45:44
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Nansenary

新虫 (初入文坛)
换标签

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2楼2021-04-19 00:43:42
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Nansenary

新虫 (初入文坛)
试试FLAG把

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3楼2021-04-19 00:43:59
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
缓冲液pH多少？缓冲液里咪唑含量有多少？
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-04-19 12:31:53
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小树懒很好

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-04-19 12:31:53
缓冲液pH多少？缓冲液里咪唑含量有多少？

缓冲液ph8.0 上柱前没加咪唑

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5楼2021-04-19 19:08:12
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小树懒很好

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Nansenary at 2021-04-19 00:43:59
试试FLAG把

我们老师不太想换标签，怕万一换了标签还是纯化不出来，白费时间，想看看大家有没有过类似的成功案例，能拿来借鉴一下

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6楼2021-04-19 19:10:30
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
GE的6FF树脂什么的都无关紧要。你有用Ni树脂或Co树脂嘛？
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
7楼2021-04-19 22:40:11
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ericdoner

新虫 (初入文坛)
1.上样我们一般咪唑浓度20mM。2.载量我们一般计算动态载量，最大载量我们一般是不考虑的，动态载量一般是最大载量的百分之30。3.根据柱直径，柱床高度，降低上样速度。

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8楼2021-04-22 19:53:55
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
氯化钠浓度提高到1-1.5M

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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
9楼2021-04-22 21:16:29
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
另外你需要搞清楚你标记的那条带到底是不是你的目的带。与目的带大小一致不一定是目的带，也可能是菌体蛋白。

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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
10楼2021-04-22 21:18:48
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