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小树懒很好

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-04-19 22:40:11
GE的6FF树脂什么的都无关紧要。你有用Ni树脂或Co树脂嘛?

嗯嗯,是用的镍亲和树脂

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11楼2021-04-23 02:16:46
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ericdoner at 2021-04-22 19:53:55
1.上样我们一般咪唑浓度20mM。2.载量我们一般计算动态载量,最大载量我们一般是不考虑的,动态载量一般是最大载量的百分之30。3.根据柱直径,柱床高度,降低上样速度。
...

好的,谢谢,大概流速多少呢,1ml/min吗

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12楼2021-04-23 02:18:40
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-04-22 21:16:29
氯化钠浓度提高到1-1.5M

请问这个提高盐离子浓度有什么原理呢

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13楼2021-04-23 02:21:40
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-04-22 21:18:48
另外你需要搞清楚你标记的那条带到底是不是你的目的带。与目的带大小一致不一定是目的带,也可能是菌体蛋白。

嗯嗯,做了空菌的对照样品,就是图中的PET,然后那个位置差不多没有带,应该是目的蛋白,纯化后也在那个位置,并且酶促反应有活性

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14楼2021-04-23 02:23:30
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 小树懒很好 at 2021-04-23 02:21:40
请问这个提高盐离子浓度有什么原理呢
...

可以使某些蛋白的标签暴露出来,同时减少离子性的非特异吸附。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
15楼2021-04-23 07:08:54
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ericdoner

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 小树懒很好 at 2021-04-23 02:18:40
好的,谢谢,大概流速多少呢,1ml/min吗
...

你的柱高,柱直径多少呢?确定是不是你的目的蛋白不能用WB么?

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16楼2021-04-23 09:13:31
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-04-23 07:08:54
可以使某些蛋白的标签暴露出来,同时减少离子性的非特异吸附。
...

好的,非常感谢

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17楼2021-04-23 10:50:48
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by ericdoner at 2021-04-23 09:13:31
你的柱高,柱直径多少呢?确定是不是你的目的蛋白不能用WB么?
...

柱子用的伯乐的20ml预装柱,直径大概两厘米,WB的话我们实验室没做过

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18楼2021-04-23 10:53:51
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海燕追梦

新虫 (正式写手)

增加蛋白和填料的结合时间,洗脱时候减少咪唑浓度,最好用his抗体WB验证一些质粒表达的正确性

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19楼2021-04-23 21:51:47
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 海燕追梦 at 2021-04-23 21:51:47
增加蛋白和填料的结合时间,洗脱时候减少咪唑浓度,最好用his抗体WB验证一些质粒表达的正确性

嗯嗯,我这次孵育了3h,感觉变化不大,我看看能不能找地方做一下WB

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20楼2021-05-03 06:14:54
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