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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » his蛋白挂柱效率低
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

[求助] his蛋白挂柱效率低 已有1人参与

C端6xhis蛋白（108kda）纯化时，使用GE的6FF树脂，载量为每毫升树脂载40mg标签蛋白，确定不过载。
且质粒测序结果正确，ORF框及his标签均正确。
尝试将his标签增加至10his，或在N端再添加
6xhis后，仍在流出液中有大量目的蛋白存在。

改变上柱的粗酶液的浓度及上样标签蛋白量也没能改善
求助该如何解决呢

his蛋白挂柱效率低


his蛋白挂柱效率低-1


@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端
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1楼 2021-04-18 23:45:44
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小树懒很好

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 海燕追梦 at 2021-04-23 21:51:47
增加蛋白和填料的结合时间，洗脱时候减少咪唑浓度，最好用his抗体WB验证一些质粒表达的正确性

嗯嗯，我这次孵育了3h，感觉变化不大，我看看能不能找地方做一下WB

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20楼2021-05-03 06:14:54
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Nansenary

新虫 (初入文坛)
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2楼2021-04-19 00:43:42
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Nansenary

新虫 (初入文坛)
试试FLAG把

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3楼2021-04-19 00:43:59
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
缓冲液pH多少？缓冲液里咪唑含量有多少？
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-04-19 12:31:53
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