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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » TA克隆及测序问题
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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] TA克隆及测序问题

我现在将PCR产物用克隆试剂盒做了TA克隆，将筛选的阳性克隆做菌液PCR，鉴定阳性克隆时用的引物是第一次PCR时的引物，没用试剂盒中克隆载体上的M13F、M13R通用引物，结果没有扩增出来。我以前这么做过并得到了目的片段，不知道这次怎么没有成功。
用载体上的通用引物鉴定和用原引物通过鉴定有差别吗？
我想再问下，这种TA克隆不算是定向克隆吧？那测出来的岂不是正反义链两条单链的序列？如何取舍？
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1楼 2009-08-10 09:02:27
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baiyidao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
克隆与方向没关系，只要引物对就行，用通用引物比较好，
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5楼2009-08-10 20:29:14
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erictan2046

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-10 20:35
如果克隆正确的话，用原引物可以P出来的，像我做TA克隆，都是用原引物P来验证的，没用过载体通用引物。
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2楼2009-08-10 11:03:14
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-10 20:35
楼上正解，我们也都是用原引物验证的，可能是假阳性呢，最好还是提取质粒验证，结合酶切
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3楼2009-08-10 13:16:14
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0): 8-10 16:12
片段上的引物有时候是P不出来的，测序公司偏向于用载体引物测．你要是测通的话就可以反过来比对．如果只测一个反应的话，你觉得插入反向了，可以重新从令一端开始测．
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2009-08-10 15:55:55
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