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RPA检测技术干货分享——你想知道的那些事（二）
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上个星期分享了关于核酸扩增检测中的一些试剂污染的注意事项，这次来继续谈谈有关污染的第二个问题——扩增产物污染。 造成核酸扩增的主要污染源就是扩增产物污染。通常，核酸经过扩增后，扩增产物的拷贝数会非常大，一般为1013拷贝/ml，远远高于检测数个拷贝的极限。因此，极微量的扩增产物，就可以造成假阳性。为了解决这个问题，一些大家都常见的，公开信息可查询到的注意事项，在这里也就不再赘述。下面主要来谈谈在以往实验过程中的具体心得和体会。 1.分区！分区！分区！ 重要的事情说三遍，通常在较规范的实验室，都是有标准的四间房来分区，即试剂配制区、样本处理区、扩增区和产物检测区，并且有相应的空气系统来防止四个区之间的空气的流动。但对于一般的实验室来说，都不具备这种条件，但是最基本要求也要在物理上实现至少两个分区，即试剂配制区和扩增区，如果需要开盖检测，则最好在另外一个区域进行。 2.开盖后要特别注意 如果是要开盖检测，那就要特别注意，吸取扩增液体的移液器要专用，一定不能够再拿来去配制试剂，在这点上我们需要特别强调。开盖之后的手套、实验服等防护用品，也要专用，不要再穿戴同一套去做前面的试剂配制。 如果是不开盖检测（如实时荧光检测），则应将扩增后的产物用一次性手套收起来，把手套口扎紧，防止扩增的液体漏出。 3.扩增产物的处理 这一点容易被实验人员所忽视，很多时候实验做完了，就随手扔进垃圾桶里，这样可能会有一个潜在风险，如果发生泄漏或是其他原因，可能会沾到一些介质上，被带到试剂中，产生假阳性。部分实验人员稍不注意，戴着手套到处走，一旦沾到手套上，则会产生很严重的污染后果。 4.及时清理 实验完成后，最重要也是特别容易被忽视的，就是实验结束后的清理工作。大部分实验室都是多人使用，偶尔发生实验人员清理不及时，被其他实验员无意间将扩增产物带到试剂配制区，污染了试剂，这种情况在污染原因排查时将十分困难。养成良好习惯，实验完成及时清理，也是防止污染的一个重要的因素。 除上述注意事项外，定期对实验中常接触位置用酒精进行擦洗，如门把手、冰箱门把手等处，可有效规避由于没及时更换手套而带来的潜在污染风险。 |
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