应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR检测限为什么不是拷贝数/反应，而是拷贝数/mL
51/1返回列表
查看: 4773  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 xbwwsq 的 4 个金币 ，回帖就立即获得 1 个金币，每人有 1 次机会
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xbwwsq

银虫 (小有名气)

[交流] qPCR检测限为什么不是拷贝数/反应，而是拷贝数/mL

目前看到的关于新冠等核酸检测试剂盒标明的检测限都是“拷贝数/mL”，这是怎么测出来的，看了很多文章都说是利用已知浓度的病毒颗粒或质粒十倍稀释后看最低能检测到的拷贝数，并没有写明详细做法。不理解的是，为什么检测限不以“拷贝数/反应”来表示，比如1000拷贝/mL的样品1mL，模板加10μL和1μL肯定是不一样的，所以这个1000拷贝/mL表示一个反应能检测到多少呢。如果我们自己设计qPCR反应，检测限应该达到多少个拷贝/反应才是合适的呢，自己做实验的时候500个拷贝/反应的ct值就已经36了，是哪里的问题呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2021-04-12 14:26:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbwwsq

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2021-04-25 14:49:10
cp/ml是以初始样本计算的，做得好的，可以做到100cp/ml。
然后取200μl样本，也就是取到了20个cp，经过核酸提取，回收率一般30~70%，还剩6~14 cp。
洗脱体积50，算上蒸发，剩余30μl 核酸，如果上样20μl，就是4~ ...

老师您好，谢谢您的回答，很好奇qPCR真能做到10 copy/反应啊，我平时做实验挺粗放，没有做过这么细。我现在做到500copy/反应的Ct值就已经34、35了，请问这个原因是什么呢，是因为引物设计的不够好吗。我的扩增效率用sybrgreen染料法测，计算下来是90%，应该也还行啊。期待您的回复
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2021-05-19 23:47:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
★
xbwwsq(金币+1): 谢谢参与
cp/ml是以初始样本计算的，做得好的，可以做到100cp/ml。
然后取200μl样本，也就是取到了20个cp，经过核酸提取，回收率一般30~70%，还剩6~14 cp。
洗脱体积50，算上蒸发，剩余30μl 核酸，如果上样20μl，就是4~9 cp。
那么对应PCR部分不计算提取的检出限就是4~9 cp/PCR
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2021-04-25 14:49:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbwwsq

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2021-04-25 14:49:10
cp/ml是以初始样本计算的，做得好的，可以做到100cp/ml。
然后取200μl样本，也就是取到了20个cp，经过核酸提取，回收率一般30~70%，还剩6~14 cp。
洗脱体积50，算上蒸发，剩余30μl 核酸，如果上样20μl，就是4~ ...

另外，如果这1ml（100cp/ml）的样本全部提取，然后用50ul洗脱，假设蒸发后剩30，上样20ul的话，这样计算下来每个反应是20-50cp/PCR，那么是不是也可以宣称这个试剂检测下限是100cp/ml 呢，这岂不是有点乱套
赞一下 回复此楼
9楼2021-05-19 23:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xbwwsq at 2021-05-19 23:47:33
老师您好，谢谢您的回答，很好奇qPCR真能做到10 copy/反应啊，我平时做实验挺粗放，没有做过这么细。我现在做到500copy/反应的Ct值就已经34、35了，请问这个原因是什么呢，是因为引物设计的不够好吗。我的扩增效率 ...

我自己做Taqman方法的，基本都在3~4 cp/PCR，100~1000cp/ml的水平，取决于提取体系、扩增体系的大小。
赞一下 回复此楼
11楼2021-05-22 08:34:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
tzynew2楼
2021-04-12 14:29   回复  
xbwwsq(金币+1): 谢谢参与
i 发自小木虫Android客户端
bjdxyxy5楼
2021-04-14 23:02   回复  
xbwwsq(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
bjdxyxy7楼
2021-04-25 15:24   回复  
bjdxyxy10楼
2021-05-20 11:26   回复  
查看全部 14 个回答
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴，则可能无法领取此贴金币
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭