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88196861铜虫 (小有名气)
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关于smart race 求助
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在利用，clontech 的smart race 做5-race，设计的也是巢式，第一轮反应什么都没有，就有引物二聚体，紧接着我就用试剂盒自带的巢式引物NUP和内部巢式特异引物进行二轮扩增，发现，呈现弥散，我的第一轮反应的特异引物Tm是61度，第二轮特异引物Tm是66度，我两轮pcr的退火温度都是65度，我估计第一轮的退火温度是不是高了，还是我的cDNA第一链合成的有问题。我pcr反应用的是ExTag.不知道是那里的问题希望达人指点 [ Last edited by 88196861 on 2009-8-8 at 17:12 ] |
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