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DYQ1231

铁虫 (初入文坛)

[求助] 启动子替换

新手，想问下各界大佬 要把现在的质粒的启动子A替换成B，请问怎么操作啊
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1楼 2021-04-03 21:59:54
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1928256858

金虫 (正式写手)
就是普通的基因克隆，酶切，做连接呀，

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2楼2021-04-03 22:46:15
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goblin7

新虫 (小有名气)
enmmmm我想了几个，可能可行吧，但我没做过这类的实验

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3楼2021-04-04 08:16:37
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goblin7

新虫 (小有名气)
1.你用同源重组的方法，因为这个方法不需要酶切，只要同源臂就行了，把启动子当成目的基因

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4楼2021-04-04 08:18:00
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goblin7

新虫 (小有名气)
2·用个反向pcr，这个方法我听别人说的，具体操作俺也不太懂

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5楼2021-04-04 08:18:57
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goblin7

新虫 (小有名气)
3.实在不行就换个质粒，或者看看质粒一开始是怎么构建的，可能有启发吧

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6楼2021-04-04 08:19:38
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DYQ1231

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-04 08:18:00
1.你用同源重组的方法，因为这个方法不需要酶切，只要同源臂就行了，把启动子当成目的基因

可不可以具体求教下啊  之前没做过这种实验  我是不是得先把原有的启动子切掉啊

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7楼2021-04-05 09:59:22
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goblin7

新虫 (小有名气)
因为我做过基因重组的质粒构建，到没有做过启动子切除，所以你查一下pretool

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8楼2021-04-05 14:51:42
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goblin7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-05 14:51:42
因为我做过基因重组的质粒构建，到没有做过启动子切除，所以你查一下pretool

pretocol,我电脑里好像有，你看看怎么方便，我找找给你

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9楼2021-04-05 14:52:31
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DYQ1231

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-05 14:52:31
pretocol,我电脑里好像有，你看看怎么方便，我找找给你
...

啊 我的邮箱dyq11131231@163.com 太感谢你了
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10楼2021-04-05 17:45:27
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