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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提RNA求助
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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 提RNA求助

刚开始作实验，先提RNA，材料是昆虫触角，开始用试剂盒提，什么都没有
后来怕触角耗费太多就先用足来试一下，但是只能提出一条带，用trizol也只能提出一条带。
研磨是用研钵磨的，用处理过的刀片刮下来转置离心管里，离心管和枪头都用DEPC处理过，过程中也小心，但是就是提不出来，请大家帮帮忙啊
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1楼 2009-08-07 16:00:50
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-8 10:41
呵呵，你的描述太少了，trouble shooting不好做啊，但你说的一条带我估计是降解的条带，如果题没有问题的话，建议在跑交方面找找问题
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2楼2009-08-07 16:11:59
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小白3521

金虫 (小有名气)
跑的电压150，10min，染色10min,配胶的水是用也是用的DEPC水，不过我电泳槽没有处理，因为师兄说他都不怎么处理的也能提出来，难道是这个原因
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3楼2009-08-07 16:24:16
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liugang66

铁杆木虫 (职业作家)

小鸟伯德
★
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引用回帖:
Originally posted by 轻5飞扬 at 2009-8-7 16:11:
呵呵，你的描述太少了，trouble shooting不好做啊，但你说的一条带我估计是降解的条带，如果题没有问题的话，建议在跑交方面找找问题

学习了
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有梦就有力量，有心就会成功！
4楼2009-08-07 16:30:04
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ncuhome

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-8 10:42
我觉得不是胶的问题，我制胶的时候没有用DEPC水处理的也照样跑出来了，RNA虽说会降解，但速度也没那么快，简单的DNA电泳，跑的时间短一点，也能清楚得看到目的片段的。
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越努力，越幸运。
5楼2009-08-07 16:50:48
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小白3521

金虫 (小有名气)
我用的材料是5月份取的，放在-80冻了3个月，会不会已经降解了？我提了几次，都只有1条带
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6楼2009-08-07 16:58:17
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
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帮顶一下，马上也要做RNA提取了。学习学习~
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7楼2009-08-07 17:24:25
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zhjwin

铁虫 (初入文坛)
★
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我的材料在-80度冻了一年，都没有问题，3条带很清楚，应该不是！楼主再找找别的问题
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8楼2009-08-08 10:41:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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是不是加太多trizol去提了
核酸太稀沉淀不下来
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9楼2009-08-08 13:01:36
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十比

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-9 15:31
材料存在-80度肯定不会有问题，我觉得提RNA关键是磨样时要用液N使材料时刻保持低温，转移至离心管里要迅速，只有放进Trizol里就不怕了！
    电泳时换新的电泳液就行，不需做什么处理，电泳跑个15-20分都行。
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10楼2009-08-08 14:56:46
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