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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 提RNA求助

刚开始作实验,先提RNA,材料是昆虫触角,开始用试剂盒提,什么都没有
后来怕触角耗费太多就先用足来试一下,但是只能提出一条带,用trizol也只能提出一条带。
研磨是用研钵磨的,用处理过的刀片刮下来转置离心管里,离心管和枪头都用DEPC处理过,过程中也小心,但是就是提不出来,请大家帮帮忙啊
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)

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呵呵,你的描述太少了,trouble shooting不好做啊,但你说的一条带我估计是降解的条带,如果题没有问题的话,建议在跑交方面找找问题
2楼2009-08-07 16:11:59
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小白3521

金虫 (小有名气)

跑的电压150,10min,染色10min,配胶的水是用也是用的DEPC水,不过我电泳槽没有处理,因为师兄说他都不怎么处理的也能提出来,难道是这个原因
3楼2009-08-07 16:24:16
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liugang66

铁杆木虫 (职业作家)

小鸟伯德


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引用回帖:
Originally posted by 轻5飞扬 at 2009-8-7 16:11:
呵呵,你的描述太少了,trouble shooting不好做啊,但你说的一条带我估计是降解的条带,如果题没有问题的话,建议在跑交方面找找问题

学习了
有梦就有力量,有心就会成功!
4楼2009-08-07 16:30:04
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ncuhome

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-8 10:42
我觉得不是胶的问题,我制胶的时候没有用DEPC水处理的也照样跑出来了,RNA虽说会降解,但速度也没那么快,简单的DNA电泳,跑的时间短一点,也能清楚得看到目的片段的。
越努力,越幸运。
5楼2009-08-07 16:50:48
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小白3521

金虫 (小有名气)

我用的材料是5月份取的,放在-80冻了3个月,会不会已经降解了?我提了几次,都只有1条带
6楼2009-08-07 16:58:17
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


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帮顶一下,马上也要做RNA提取了。学习学习~
7楼2009-08-07 17:24:25
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zhjwin

铁虫 (初入文坛)


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我的材料在-80度冻了一年,都没有问题,3条带很清楚,应该不是!楼主再找找别的问题
8楼2009-08-08 10:41:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
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是不是加太多trizol去提了
核酸太稀沉淀不下来
9楼2009-08-08 13:01:36
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十比

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-9 15:31
材料存在-80度肯定不会有问题,我觉得提RNA关键是磨样时要用液N使材料时刻保持低温,转移至离心管里要迅速,只有放进Trizol里就不怕了!
    电泳时换新的电泳液就行,不需做什么处理,电泳跑个15-20分都行。
10楼2009-08-08 14:56:46
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