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[求助]
求助，毕赤酵母系统表达阿魏酸酯酶，蛋白没有活性，可能哪些问题，该怎么解决现状？ 已有2人参与
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本人初入分子生物，用PPIZCA质粒重组了阿魏酸酯酶的基因序列，然后我把重组质粒导入毕赤酵母中。结果是，PCR和测序验证基因大小和序列没问题，western blot也做了能看到所在处清晰的条带，但是有一次出现了包涵体，这一次没有，我用这一次的粗酶液和提纯的蛋白测试酶活性，结果一点活性没有。请教大佬帮我分析一下可能的原因和解决办法。 @gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端 |
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我都测了，摇完菌体得上清，取了100微升测得酶活，没有。菌体重悬破碎，离心得上清，取了100微升测得酶活，也没有。就是胞内酶液和胞外酶液我都测了，没有。我准备重复一次。但是也想看看其他的问题，是不是我破碎的方式有问题导致酶失活了，或者是我用来测活性的量太少了。 发自小木虫Android客户端 |
11楼2021-03-30 21:52:44
forhighbio 
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3楼2021-03-28 12:48:27
snoopyzxx
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4楼2021-03-28 22:42:20
20
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