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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE结果出来一片空白
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Evan3952

木虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE结果出来一片空白

刚跑电泳，考马斯亮蓝染色出来的结果一片空白，连marker都没有，各位给点意见，大致情况这样：
1.用的是4%和20%的胶，maker（26bp起）浓度25ug/ml，我加了20ul
2.用甘氨酸，100付电
3.溴酚蓝跑到后面出现2条带，一粗一细，是否是因为溴酚蓝加多了？
4.考马斯亮蓝配得比较久，有没影响？从我来之前就有人配的，只是没什么人用， 至少1-2年，室温保存的，我用的时候那滤纸过滤了一下
5.胶是即配即用的，
6.AP，SDS用的是普通的分析纯，很想知道这些试剂有哪些是必须买电泳专用的？
7.染色染了30-60min，整背景是蓝的，那水冲冲看着就出了溴酚蓝，其他都浅蓝浅蓝一片的，脱色后就白茫茫一片了，对着就欲哭无泪。。。
8.东西对热还是比较稳定的，11bp左右大
9.水这边用的都是二级渗透的

大家帮帮忙，看看怎么回事。。。。。。

[ Last edited by Evan3952 on 2009-8-7 at 03:37 ]
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1楼 2009-08-07 03:25:55
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chengML

银虫 (小有名气)
★
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这么久了的溴酚蓝还用啊？有时想省事，结果会是多事
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2楼2009-08-07 03:46:56
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Evan3952

木虫 (小有名气)
是考马斯亮蓝啦，是不是不能用了 啊？
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3楼2009-08-07 04:41:33
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xuezhen

银虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-7 12:47
有没有进行脱色呀？有时要脱色久一点，才能看到结果的。可以用7%的冰醋酸进行过夜轻微摇床震荡脱色。染色染个20-30min就可以了，脱色挺关键的，不然就是你的染液有问题了。一定要脱色的，直到脱色液较澄清吧！希望对你有用。呵呵！
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4楼2009-08-07 09:49:25
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
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DNA应该是EB染色，考染是观察蛋白的。
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5楼2009-08-07 12:37:44
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-7 12:48
你做的是蛋白还是DNA啊？
如果是DNA建议用EB
如果是蛋白 我估计是你把样品跑出去了的可能性大 再者你的电泳缓冲液有问题
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海纳百川止于至善
6楼2009-08-07 12:42:19
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qfzhang

银虫 (小有名气)
AP估计过期了吧
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7楼2009-08-07 13:49:50
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greatsun

木虫 (正式写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-7 15:17
如果Marker都没有的话，建议再跑一次看看！！

有时做实验就是很奇怪，条件一样，结果就是不一样！！
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8楼2009-08-07 15:16:09
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
★
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我也碰到这种情况了，跑的是蛋白质，考马斯亮蓝染色后过夜脱色，loading buffer颜色不太对，挺浅的，但是按照配方来的）
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9楼2009-08-07 15:40:05
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Evan3952

木虫 (小有名气)
谢谢各位
我跑的是蛋白，只是maker用的是酶切出来的片段，主要是想看看有多少个蛋白，昨天做不出来后就把它泡在洗脱液里过夜，之前没做过银染，今天去了想着坏了都坏了，就拿去做银染，对着书做，结果就出带了，只是跑的不是很好
不过好歹出带了，应该考马斯亮蓝不行，这次亏真是吃大了
不过很想问一句，AP跟SDS分析纯没问题吧？
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10楼2009-08-07 23:29:26
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