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Evan3952

木虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE结果出来一片空白

刚跑电泳,考马斯亮蓝染色出来的结果一片空白,连marker都没有,各位给点意见,大致情况这样:
1.用的是4%和20%的胶,maker(26bp起)浓度25ug/ml,我加了20ul
2.用甘氨酸,100付电
3.溴酚蓝跑到后面出现2条带,一粗一细,是否是因为溴酚蓝加多了?
4.考马斯亮蓝配得比较久,有没影响?从我来之前就有人配的,只是没什么人用, 至少1-2年,室温保存的,我用的时候那滤纸过滤了一下
5.胶是即配即用的,
6.AP,SDS用的是普通的分析纯,很想知道这些试剂有哪些是必须买电泳专用的?
7.染色染了30-60min,整背景是蓝的,那水冲冲看着就出了溴酚蓝,其他都浅蓝浅蓝一片的,脱色后就白茫茫一片了,对着就欲哭无泪。。。
8.东西对热还是比较稳定的,11bp左右大
9.水这边用的都是二级渗透的

大家帮帮忙,看看怎么回事。。。。。。

[ Last edited by Evan3952 on 2009-8-7 at 03:37 ]
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chengML

银虫 (小有名气)


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这么久了的溴酚蓝还用啊?有时想省事,结果会是多事
2楼2009-08-07 03:46:56
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Evan3952

木虫 (小有名气)

是考马斯亮蓝啦,是不是不能用了 啊?
3楼2009-08-07 04:41:33
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xuezhen

银虫 (小有名气)

★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-7 12:47
有没有进行脱色呀?有时要脱色久一点,才能看到结果的。可以用7%的冰醋酸进行过夜轻微摇床震荡脱色。染色染个20-30min就可以了,脱色挺关键的,不然就是你的染液有问题了。一定要脱色的,直到脱色液较澄清吧!希望对你有用。呵呵!
4楼2009-08-07 09:49:25
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
DNA应该是EB染色,考染是观察蛋白的。
5楼2009-08-07 12:37:44
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-7 12:48
你做的是蛋白还是DNA啊?
如果是DNA建议用EB
如果是蛋白 我估计是你把样品跑出去了的可能性大 再者你的电泳缓冲液有问题
海纳百川止于至善
6楼2009-08-07 12:42:19
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qfzhang

银虫 (小有名气)

AP估计过期了吧
7楼2009-08-07 13:49:50
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greatsun

木虫 (正式写手)


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-7 15:17
如果Marker都没有的话,建议再跑一次看看!!

有时做实验就是很奇怪,条件一样,结果就是不一样!!
8楼2009-08-07 15:16:09
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tiani_tan

金虫 (小有名气)


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我也碰到这种情况了,跑的是蛋白质,考马斯亮蓝染色后过夜脱色,loading buffer颜色不太对,挺浅的,但是按照配方来的)
9楼2009-08-07 15:40:05
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Evan3952

木虫 (小有名气)

谢谢各位
我跑的是蛋白,只是maker用的是酶切出来的片段,主要是想看看有多少个蛋白,昨天做不出来后就把它泡在洗脱液里过夜,之前没做过银染,今天去了想着坏了都坏了,就拿去做银染,对着书做,结果就出带了,只是跑的不是很好
不过好歹出带了,应该考马斯亮蓝不行,这次亏真是吃大了
不过很想问一句,AP跟SDS分析纯没问题吧?
10楼2009-08-07 23:29:26
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