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Evan3952

木虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE结果出来一片空白

刚跑电泳,考马斯亮蓝染色出来的结果一片空白,连marker都没有,各位给点意见,大致情况这样:
1.用的是4%和20%的胶,maker(26bp起)浓度25ug/ml,我加了20ul
2.用甘氨酸,100付电
3.溴酚蓝跑到后面出现2条带,一粗一细,是否是因为溴酚蓝加多了?
4.考马斯亮蓝配得比较久,有没影响?从我来之前就有人配的,只是没什么人用, 至少1-2年,室温保存的,我用的时候那滤纸过滤了一下
5.胶是即配即用的,
6.AP,SDS用的是普通的分析纯,很想知道这些试剂有哪些是必须买电泳专用的?
7.染色染了30-60min,整背景是蓝的,那水冲冲看着就出了溴酚蓝,其他都浅蓝浅蓝一片的,脱色后就白茫茫一片了,对着就欲哭无泪。。。
8.东西对热还是比较稳定的,11bp左右大
9.水这边用的都是二级渗透的

大家帮帮忙,看看怎么回事。。。。。。

[ Last edited by Evan3952 on 2009-8-7 at 03:37 ]
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parentgy

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by Evan3952 at 2009-8-7 23:29:
谢谢各位
我跑的是蛋白,只是maker用的是酶切出来的片段,主要是想看看有多少个蛋白,昨天做不出来后就把它泡在洗脱液里过夜,之前没做过银染,今天去了想着坏了都坏了,就拿去做银染,对着书做,结果就出带了, ...

AP和SDS没有多少关系的,一个是主要配胶要配好,还有就是染色脱色的问题。我染色脱色一般都在微波炉里打一下 ,快速染色脱色,效果还不错
13楼2009-08-08 10:31:51
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chengML

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这么久了的溴酚蓝还用啊?有时想省事,结果会是多事
2楼2009-08-07 03:46:56
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Evan3952

木虫 (小有名气)

是考马斯亮蓝啦,是不是不能用了 啊?
3楼2009-08-07 04:41:33
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xuezhen

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-7 12:47
有没有进行脱色呀?有时要脱色久一点,才能看到结果的。可以用7%的冰醋酸进行过夜轻微摇床震荡脱色。染色染个20-30min就可以了,脱色挺关键的,不然就是你的染液有问题了。一定要脱色的,直到脱色液较澄清吧!希望对你有用。呵呵!
4楼2009-08-07 09:49:25
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