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求各位帮帮忙——关于基因克隆
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一个基因我整了半年，到现在全长还没克隆出来。 具体情况是这样的：我得到的保守区域有306个bp，根据这个保守区设计特异引物分别扩增3'端和5'端，3'端用3'RACE的方法扩增，5'端用染色体步移法，扩增出来的3'端和5'端片断与保守区重叠的部分各有80多个bp，我认为这可能就是一个基因的两端了，于是拼接后扩全长，但是扩不出来。后来设计的特异引物放在了离两端更远的位置，但似乎保守区太保守，总得不到想要片断。 请问各位，我这保守区是不是太短了？ |
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