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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 未纯化PCR能直接转化测序么
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454278916

铜虫 (初入文坛)

[求助] 未纯化PCR能直接转化测序么

200bp左右序列，单条带，很亮，连接转化后蓝白筛选，白斑篮斑都有，挑选了10个左右白斑测序，测序结果都是空的，是不是这样做转不进去呢
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1楼 2021-02-26 10:30:29
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
楼主的问题听不懂。是说PCR产物没纯化除去PCR的缓冲液，就直接用T4连接酶和相应的缓冲液做连接吗？
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-02-26 13:25:21
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454278916

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-02-26 13:25:21
楼主的问题听不懂。是说PCR产物没纯化除去PCR的缓冲液，就直接用T4连接酶和相应的缓冲液做连接吗？

emm...差不多吧，就是从PCR仪拿出来直接去做连接转化了，没用试剂盒纯化或者切胶回收
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3楼2021-02-26 17:09:52
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
3楼: Originally posted by 454278916 at 2021-02-26 17:09:52
emm...差不多吧，就是从PCR仪拿出来直接去做连接转化了，没用试剂盒纯化或者切胶回收...

一般来说是做不出来的。不过这都不碍事儿，一天的工夫自己重新做一遍就好了
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-02-27 09:57:52
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454278916

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-02-27 09:57:52
一般来说是做不出来的。不过这都不碍事儿，一天的工夫自己重新做一遍就好了...

好的好的
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5楼2021-02-27 13:06:40
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