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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » infusion克隆后菌落PCR送测序全部为载体序列
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youxistar

金虫 (小有名气)

[求助] infusion克隆后菌落PCR送测序全部为载体序列

使用infusion克隆，切胶回收得到片段为500bp+的位置，按说明转入后进行蓝白斑筛选，涂抹平板后37℃过夜培养，过了13小时+，看没有怎么长菌（而且居然还没有蓝色菌落！），于是过了18小时+再取出来，选取目测长的好的单菌落，用灭菌的牙签蘸菌落，进行PCR鉴定，将结果出现目的位置条带的菌落送测序，5个测出了的序列，经blast全部为载体的序列，崩溃了啊。求教可能的原因是什么呢？谢谢各位老师了。还有就是某个平板涂后培养，第二天看黏糊糊一片，这是什么情况呢？（涂抹80微升，用的一次性L型涂布棒，蒋菌液滴多处在平板上面后，像摊煎饼一样摊转一圈这样涂的）。

infusion克隆后菌落PCR送测序全部为载体序列
QQ图片20210202173253.jpg
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1楼 2021-02-02 17:38:01
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
你的菌太多了，都长糊了。你应该蓝白斑和抗性筛选同时做，平板也要加抗生素，这样才能保证让没有转化质粒的菌不生长。

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2楼2021-02-02 20:12:33
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