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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » DNS法测定纤维素酶活的问题
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)

[求助] DNS法测定纤维素酶活的问题 已有2人参与

我最近在测纤维素降解菌的酶活力。这些菌有做过刚果红染色的纤维素平板，是明显有水解圈的。养在cmc-na发酵培养基里也有明显的浑浊。但是取粗提酶液用DNS法测了以后是完全没有酶活，不知道是为什么。另外，DNS试剂做葡萄糖的标曲也碰到了问题：加dns试剂后吸光度一直不稳定，越来越高，这是什么原因，请问有人遇到过吗？

非常急，希望有做过的大神能给解答！必有重谢！！！

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1楼 2021-01-29 04:19:22
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小马哥4561 at 2021-03-26 13:36:16
延长酶反应时间试一试，标准曲线做不好可能与试剂配得不好或者反应方法不当有关。

现在发现问题是在低浓度的时候测不出吸光度。我做标曲的时候发现葡萄糖浓度为0.2mg/mL的时候吸光度只有0.00几，几乎就是空白了（梯度是按文献做的0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0），0.4-1.0范围吸光度和别人的吻合，但就是0.2测不出吸光度。我现在猜测可能就是因为30分钟酶活反应产生的还原糖的量就在这个测不出吸光度的范围，所以我才会测不出酶活。但是为什么测不出吸光度我琢磨了好久也没有研究出来，不知道您有没有遇到过这种情况

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13楼2021-04-08 13:15:23
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碎梦醉蝶

新虫 (正式写手)
你的葡萄糖纯么？

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2楼2021-01-29 09:55:07
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青灯与酒

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
TerryHLHL(fuyuandj86代发): 金币+5 2021-04-26 18:15:41
DNS会不会失效了？

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6楼2021-03-23 11:47:14
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普通回帖

TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 碎梦醉蝶 at 2021-01-29 09:55:07
你的葡萄糖纯么？

葡萄糖用的AR的，应该算纯了吧，难道这个实验还要GR的？

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3楼2021-01-29 10:04:58
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
没人吗...看来做这个实验的人太少了

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4楼2021-01-30 16:20:04
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
救命

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5楼2021-02-04 17:33:52
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小马哥4561

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
TerryHLHL(fuyuandj86代发): 金币+5 2021-04-26 18:14:34
延长酶反应时间试一试，标准曲线做不好可能与试剂配得不好或者反应方法不当有关。

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7楼2021-03-26 13:36:16
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海韵楠馨

新虫 (小有名气)
我也在做DNS实验，测的是α-淀粉酶活性抑制实验，结果吸光度也很不稳定。也不知道是什么原因
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8楼2021-04-03 16:20:56
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海韵楠馨

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
TerryHLHL(fuyuandj86代发): 金币+5 2021-04-26 18:14:50
引用回帖:
3楼: Originally posted by TerryHLHL at 2021-01-29 10:04:58
葡萄糖用的AR的，应该算纯了吧，难道这个实验还要GR的？
...

AR的可以了，没必要用GR的。还有一个可能是移液枪有问题，每次吸的量差异有点大。
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9楼2021-04-03 16:23:03
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青灯与酒 at 2021-03-23 11:47:14
DNS会不会失效了？

我之前也以为dns失效了，但是后来买了现成的也是一样的问题。就是在低浓度的时候测不出吸光度（葡萄糖浓度小于0.2mg/mL的时候）

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10楼2021-04-08 13:01:19
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