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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » DNS法测定纤维素酶活的问题
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 海韵楠馨 at 2021-04-03 16:23:03
AR的可以了，没必要用GR的。还有一个可能是移液枪有问题，每次吸的量差异有点大。...

移液枪是正常的，我还用移液枪做过别的标曲，四个九。现在发现问题是在低浓度的时候测不出吸光度。我做标曲的时候发现葡萄糖浓度为0.2mg/mL的时候吸光度只有0.00几，几乎就是空白了（梯度是按文献做的0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0），0.4-1.0范围吸光度和别人的吻合，但就是0.2测不出吸光度。我现在猜测可能就是因为30分钟酶活反应产生的还原糖的量就在这个测不出吸光度的范围，所以我才会测不出酶活。但是为什么测不出吸光度我琢磨了好久也没有研究出来，不知道您有没有遇到过这种情况

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11楼2021-04-08 13:10:46
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by 海韵楠馨 at 2021-04-03 16:20:56
我也在做DNS实验，测的是α-淀粉酶活性抑制实验，结果吸光度也很不稳定。也不知道是什么原因

吸光度不稳定的话，不知道你混合完之后有没有用涡旋混匀过？这个问题我已经解决了，我当时是手动混匀的，后来仔细看了发现dns试剂和水没这么容易混匀，最好还是要涡旋震荡一下

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12楼2021-04-08 13:13:49
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 小马哥4561 at 2021-03-26 13:36:16
延长酶反应时间试一试，标准曲线做不好可能与试剂配得不好或者反应方法不当有关。

现在发现问题是在低浓度的时候测不出吸光度。我做标曲的时候发现葡萄糖浓度为0.2mg/mL的时候吸光度只有0.00几，几乎就是空白了（梯度是按文献做的0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0），0.4-1.0范围吸光度和别人的吻合，但就是0.2测不出吸光度。我现在猜测可能就是因为30分钟酶活反应产生的还原糖的量就在这个测不出吸光度的范围，所以我才会测不出酶活。但是为什么测不出吸光度我琢磨了好久也没有研究出来，不知道您有没有遇到过这种情况

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13楼2021-04-08 13:15:23
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Walt_icefire

新虫 (初入文坛)
楼主用的是国标测酶活吗？

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14楼2021-04-21 18:35:36
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小马哥4561

新虫 (初入文坛)
标准曲线做不好，可能就是糖测不准，试剂新配，或者试剂不达标。购买好的大牌试剂，严格按照要求配试剂，标准曲线到0.99以上没有问题

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15楼2021-04-24 11:15:37
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小马哥4561

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
TerryHLHL(fuyuandj86代发): 金币+5 2021-04-26 18:15:21
引用回帖:
13楼: Originally posted by TerryHLHL at 2021-04-08 13:15:23
现在发现问题是在低浓度的时候测不出吸光度。我做标曲的时候发现葡萄糖浓度为0.2mg/mL的时候吸光度只有0.00几，几乎就是空白了（梯度是按文献做的0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0），0.4-1.0范围吸光度和别人的吻合，但就是 ...

2个小时酶活反应试一试，如果可以，说明反应时间太短了，产糖量太少

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16楼2021-04-24 11:18:17
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谁跟我重名

新虫 (小有名气)
请问DNS法测还原糖怎么把吸光度转为含糖量？

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17楼2021-05-19 00:22:19
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wkj1015

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也是做这个实验，现象一模一样，就是找不到问题！
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18楼2021-11-22 23:04:35
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